猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea,PED)是一种由猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)引起仔猪的急性水样腹泻、呕吐甚至脱水等症状的高致病性肠道传染病。2010年以来,PED在中国出现大面积流行,对我国养猪业造成了巨大的经济损失,主要原因是其S基因变异导致PEDV CV777毒株所研制出来的疫苗无法对猪形成完全有效的保护。因此,开展PEDV流行株的分子生物学特征及致病机制对研制新型疫苗具有非常重要的意义。本研究开展了5株PEDV分离株的S1基因和ORF3基因的全长序列遗传进化及序列比对分析,S1基因的系统发育分析表明PEDV YJH株属于G2b型,其余4个分离株属于G2a型。与经典毒株CV777的氨基酸比对分析,发现5个毒株的S1基因在56-60个不同位点存在氨基酸突变、5个氨基酸的插入和2个氨基酸的缺失:5株分离株都在第59-62位点出现了4个氨基酸(QGVN)的插入,在139位点处插入了天冬氨酸或赖氨酸;在163-164位点出现了2个氨基酸(DI)的缺失。ORF3基因的比对分析发现5个毒株在6个位点出现相同的氨基酸改变(V21A;V54I;V79I;L92F;A101T;N166S),其中PEDV HH、PEDV SQ、PEDV TQ这三个分离株在4个位点出现一致的氨基酸改变(L25S、I70V、C107F、N168S),PEDV YJH与PEDV HY两个毒株在2个位点发生相同的氨基酸改变(F80V;H182Q)。ORF3基因的进化分析表明2017年分离的5个PEDV分离株都属于G2型,而疫苗株属于G1型。动物试验结果表明5个分离株对仔猪均具有高致病性,其中PEDV YJH株毒性最强,PEDV HY株与其他株相比较弱。本研究将PEDV YJH株和PEDV HH株在体外连续传代培养至90代和140代,进化分析表明连续传代后的PEDV YJH株仍属于G2b型,PEDV HH株仍属于G2a型。S1基因的氨基酸比对结果表明,两个毒株传代至140代时同时存在第27和57位氨基酸改变(S27L;E57K)和第55和56位氨基酸缺失的现象。细胞适应性研究发现,PEDV YJH株第25代(F25)传代所需胰酶浓度为5μg/μL,但传至140代(F140)时发现在不添加胰酶的情况下病毒也能侵染细胞进行增殖。S蛋白是决定PEDV胰酶依赖性的关键蛋白,F25与F140代病毒的S蛋白比对结果表明,二者存在2个氨基酸的缺失和12个氨基酸的突变的差异。动物实验结果表明,PEDV YJH株连续传代后毒力减弱,对仔猪不致病,具有较好的安全性,血清抗体检测结果证明该弱毒株可诱导仔猪产生免疫反应,可作为研制PEDV减毒活疫苗的候选毒株。本研究通过分析PEDV分离株的遗传变异情况,利用传代方法致弱了PEDV流行毒株,分析了其胰酶耐受等生物学特征,为进一步建立PED的防控技术提供基础材料。