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[目的]构建恒河猴反义miR-155(Micro RNA-155,微小RNA-155)慢病毒载体并鉴定,诱导并培养恒河猴未成熟的树突状细胞,用重组的反义miR-155慢病毒载体转染恒河猴未成熟树突状细胞,PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链式反应)检测miR-155在恒河猴未成熟树突状细胞中的表达。[方法]1.将慢病毒载体酶切,与目的基因的退火双链DNA连接,其产物加入感受态细胞中培养。将培养出的载体进行测序。包装慢病毒载体,经浓缩纯化后,使用药筛法测定病毒滴度。2.使用恒河猴外周血,通过加入细胞因子GM-CSF(Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)(1 OOng/ml)、IL-4(Interleukin-4,白细胞介素-4)(50ng/ml)体外诱导并培养恒河猴未成熟的树突状细胞,通过流式细胞仪及扫描电镜进行免疫表型鉴定及超微结构观察。3.用重组慢病毒载体转染恒河猴的未成熟树突状细胞,RT-qPCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,实时荧光定量多聚核苷酸链式反应)检测miR-155在恒河猴未成熟树突状细胞中的表达。[结果]经测序结果显示目的序列与前期设计序列一致(ACCCCTATCACGATTAGCATTAA)。经细胞包装并纯化后用药筛法测定病毒滴度为2E+9TU/mL。诱导并培养的细胞在400X光镜下可见明显树突和分支,经流式细胞仪及扫描电镜观察,细胞免疫表型和超微结构符合未成熟树突状细胞。重组的慢病毒载体转染恒河猴未成熟的树突状细胞,RT-qPCR检测到转染后的细胞中miR-155受到抑制。[结论]通过反义miR-155与慢病毒载体连接成功构建恒河猴反义miR-155慢病毒载体,后通过恒河猴外周血成功培养并诱导出恒河猴未成熟树突状细胞,用重组的慢病毒载体感染未成熟树突状细胞,经RT-qPCR检测到miR-155下调,目的基因在靶细胞内成功表达。[展望]通过重组的恒河猴反义miR-155慢病毒载体转染恒河猴树突状细胞,期望得到导致免疫耐受性的树突状细胞,后续用树突状细胞进行恒河猴肝移植免疫耐受的研究。