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目的以原代培养胎鼠海马神经元的氧糖剥夺(Oxygen-glucose deprivation,OGD)模型为基础,通过沉默信息调节因子2相关酶1(Silent mating type information regulation 2 homolog-1,Sirt1)的激动剂白藜芦醇(Resveratrol,RSV)和抑制剂 EX527干预,观察OGD后Sirt1的mRNA和蛋白水平表达变化,海马神经元的凋亡情况和氧化应激指标变化,以及过氧化物酶体增殖激活物受体γ辅激活因子1α(Peroxisome proliferator activator receptor gamma coactivator 1α,PGC-1α)的表达变化,以探究Sirt1对OGD后海马神经元氧化应激的调控作用以及可能的调控途径。材料及方法本课题以原代培养的胎鼠海马神经元为实验对象,通过免疫荧光技术标记神经元特异核蛋白(Neuronal Nuclei,NeuN)鉴定所培养神经元纯度。以细胞氧糖剥夺模型为基础,用RSV和EX527处理细胞,Real-time PCR和Western blot法检测Sirt1的mRNA和蛋白水平的表达量。同时,检测细胞死亡率、细胞活力和氧化应激指标SOD、MDA含量,PGC-1α的mRNA和蛋白水平的表达量变化。不同组间的数据比较采用独立样本t检验,数据以均值±标准差表示。检验水准α=0.05,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果1.原代海马神经元培养、鉴定和氧糖剥夺模型建立所培养神经元生长良好,接种第七天后,树突及轴突相互交织成网络,神经元发育成熟;经免疫荧光技术检测显示神经元纯度>95%,可进行后续实验;OGD12h后观察到细胞核固缩、核碎裂、突触断裂等现象,MTT法检测对照组和OGD12h组的细胞活力分别是100.000±4.526%、63.247±1.930%,OGD组的细胞活力比对照组有明显降低(P<0.01,n=3),模型制作成功。2.OGD后Sirt1的mRNA和蛋白水平表达量变化与对照组相比,OGD组Sirt1的mRNA水平和蛋白水平相对表达量均有降低(P<0.01,n=3);(P<0.05,n=3)。3.EX527、RSV对OGD后海马神经元中Sirt1表达的影响1)EX527处理:与OGD组相比,OGD+EX527组Sirt1的mRNA水平和蛋白水平相对表达量均有降低(P<0.05,n=3);(P<0.05,n=3)。与OGD+EX527组相比,OGD+EX527+RSV组Sirt1的mRNA水平和蛋白水平相对表达量均有增高(P<0.05,n=3);(P<0.05,n=3)。2)RSV处理:与OGD组相比,OGD+RSV组Sirt1的mRNA水平和蛋白水平相对表达量均有增高(P<0.01,n=3);(P<0.05,n=3)。4.EX527、RSV对OGD后海马神经细胞活力、凋亡率和MDA、SOD含量的影响1)EX527处理:与OGD组相比,OGD+EX527组的细胞活力明显下降(P<0.01,n=6),每单位蛋白SOD含量下降(P<0.01,n=6),每单位蛋白MDA含量增加(P<0.01,n=6),细胞凋亡率增加(P<0.01,n=6),Caspase3的表达量没有明显增高(P>0.05,n=3)。与OGD+EX527组相比,OGD+EX527+RSV组的细胞活力增加(P<0.01,n=6),每单位蛋白SOD含量增高(P<0.01,n=6),每单位蛋白MDA含量降低(P<0.01,n=6),细胞凋亡率减少(P<0.01,n=6),Caspase3的表达量下降(P<0.01,n=3)。2)RSV处理:与OGD组相比,OGD+RSV组的细胞活力增高(P<0.01,n=6),每单位蛋白SOD含量增加(P<0.01,n=6),每单位蛋白MDA含量下降(P<0.01,n=6),细胞凋亡率下降(P<0.01,n=6),Caspase3的表达量下降(P<0.01,n=3)。3)RSV预处理:与OGD组相比,OGD+RSV预处理组细胞活力增高(P<0.01,n=6),细胞凋亡率下降(P<0.01,n=6),Caspase3的表达量没有明显下降(P>0.05,n=3)。5.Sirt1对PGC-1α的调控作用1)EX527 处理:与 OGD 组相比,OGD+EX527 组 PGC-1α 的 mRNA 水平和蛋白水平相对表达量均有降低(P<0.05,n=3);(P<0.05,n=3)。与OGD+EX527组相比,OGD+EX527+RSV组PGC-1α的mRNA水平相对表达量增加(P<0.05,n=3),蛋白水平相对表达量没有明显增加(P>0.05,n=3)。2)RSV处理:与OGD组相比,OGD+RSV组PGC-1α的mRNA水平和蛋白水平相对表达量均有增加(P<0.01,n=3);(P<0.01,n=3)。3)EX527、RSV处理后Sirt1和PGC-1α表达变化的关系①EX527处理组:与OGD组相比,OGD+EX527组Sirt1和PGC-1α的mRNA水平和蛋白水平相对表达量均有下降。与OGD+EX527组相比,OGD+EX527+RSV组Sirt1和PGC-1α的mRNA水平相对表达量均有增高;Sirt1蛋白水平相对表达量增高,而PGC-1α无明显增高。②RSV处理组:与OGD组相比,OGD+RSV组Sirt1和PGC-1α的mRNA 水平和蛋白水平相对表达量均有增加。结论在氧糖剥夺的海马神经元中,Sirt1可能通过调控PGC-1α发挥其抗氧化应激的神经保护作用。