黄地可溶性粉的制备及对小鼠免疫功能影响的初步研究

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:andyzt509
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机体自身的免疫功能失调或缺陷会导致许多疾病的发生、发展。肿瘤会引起机体免疫功能降低,淋巴细胞数量一定程度上能反映机体免疫功能强弱。因此,提高动物机体的淋巴细胞数量来提高免疫力非常重要。黄芪和地榆是传统中草药,现代药理学研究表明,两者能提高动物淋巴细胞数量,都具有增强免疫低下动物的免疫功能的作用。因此,本文研究了黄地可溶性粉(由黄芪、地榆提取物组成)的优化工艺,及其对免疫低下小鼠免疫功能的影响。旨在探讨黄芪与地榆配伍后对小鼠免疫功能的影响,为两者配伍用于开发免疫增强剂奠定基础。研究的主要内容和结果如下:1.黄地可溶性粉的提取工艺研究本章根据《中国兽药典》的规定对黄芪、地榆两味药材进行了性状、鉴别、检查的研究,并对两药的合并浸渍与分别浸渍两种方法进行比较。建立了地榆有效成分含量的HPLC检测方法,黄芪有效成分含量的苯酚—硫酸法检测方法。根据单因素试验结果,以小鼠脾淋巴细胞增殖率和有效成分含量为指标,采用正交设计试验优化工艺参数。结果表明,采取分别浸渍法能得到更好的结果。黄芪的最佳提取工艺为:料液比1:10,水浴温度80℃,提取1次,每次2 h。地榆的最佳提取工艺为:料液比1:10,水浴温度90℃,提取3次,每次1.5 h。按照最佳工艺提取后,所得黄芪提取物中黄芪多糖含量为60.17 mg/g,其处理的小鼠脾淋巴细胞增殖率为40.85%。所得地榆提取物中地榆皂苷Ι含量为4.38 mg/g,没食子酸含量为8.43 mg/g,其处理的小鼠脾淋巴细胞增殖率为80.28%。2.黄地可溶性粉对环磷酰胺所致的免疫低下小鼠免疫功能影响的研究本章进行了小鼠脾淋巴细胞毒性试验与初步药效学研究。以小鼠脾淋巴细胞增殖率为指标,采用基线等比增减法筛选黄芪与地榆的配伍比例。结果表明,黄芪、地榆浓度在0-100μg/m L范围内,对脾淋巴细胞没有毒性作用。以生药计,地榆与黄芪的最佳配比为6:3。18-22 g的KM小鼠120只,雌雄各半,随机分为6组。依次为空白组、模型组、黄地可溶性粉高、低剂量组(FS,600 mg/kg、FA,100 mg/kg;FS,300 mg/kg、FA,50 mg/kg,以生药计,地榆:黄芪=6:3)、黄芪组(FA,100 mg/kg)和地榆组(FS,600 mg/kg)。给药组小鼠按给药剂量灌胃给药,连续14d。第9 d开始,空白组腹腔注射生理盐水,其余每组均腹腔注射环磷酰胺80 mg/kg/d,连用3 d。第15 d对小鼠进行称重,处死。解剖后称量肝脏、胸腺、脾脏,计算脏器指数;采用CCK-8法检测小鼠脾脏T、B淋巴细胞增殖率;使用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群数量(CD3+/CD4+/CD8+T细胞);采用酶联免疫法(ELISA)检测小鼠血清中Ig G、Ig M、IL-2、IL-4、IFN-γ的含量。结果表明:(1)可溶性粉组、地榆组的脾脏指数、肝脏指数显著升高(P<0.05);黄芪组的脾脏指数、肝脏指数及各给药组的胸腺指数均有提高,但无显著性差异(P>0.05)。(2)给药组的T、B淋巴细胞增殖率均显著上升(P<0.05)。可溶性粉高剂量组效果最好;且各给药组间的T、B淋巴细胞增殖率差异均显著(P<0.05)。(3)空白组、可溶性粉组、各单方组的CD3+、CD4+、CD8+T细胞百分比均显著上升(P<0.05),且可溶性粉低剂量组效果最好;可溶性粉高剂量组的CD4+/CD8+比例显著上升(P<0.05)。(4)可溶性粉低剂量组、单方组能显著升高免疫低下小鼠的IL-4、IFN-γ、Ig G、Ig M水平(P<0.05);对于IL-4、Ig G、Ig M水平来说,可溶性粉低剂量组的提升效果最好。黄地可溶性粉可以显著提高免疫低下小鼠的T、B淋巴细胞增殖率、CD4+、CD8+T细胞百分比。两药配伍能在一定程度上改善环磷酰胺所致的免疫低下小鼠的免疫力。
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