苦参碱与化疗药物的协同作用及逆转乳腺癌耐药株MCF-7/ADR多药耐药与PI3K/AKT通道的关系

来源 :宁夏医科大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:a2590222
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目的探索苦参碱与化疗药物的协同作用及对乳腺癌耐药株MCF-7/ADR多药耐药的逆转作用及其机制。方法采用MTT法检测不同浓度的化疗药单药及联合0.05g/L苦参碱作用乳腺癌细胞株MCF-7细胞24h后的生长抑制率;检测不同浓度苦参碱和MK2206作用乳腺癌耐药株MCF-7/ADR细胞24 h后的生长抑制率,以抑制率为10%的药物浓度为检测标准;用荧光RT-PCR、Western blotting法检测不同浓度苦参碱作用MCF-7/ADR细胞24 h后MDR1、MRP1、PTEN、AKT基因m RNA和蛋白的表达。结果MTT结果显示随着两种化疗药物的浓度增加,抑制率呈递增趋势,并且相同浓度的化疗药物和苦参碱联合用药组的细胞抑制率明显高于化疗药物单药组(P<0.05)。荧光定量RT-PCR结果显示0.6、1.2g/L的苦参碱干预组与空白对照组相比,随着苦参碱浓度的提高,耐药基因MDR1、MRP1的表达量逐渐降低(0.6 g/L苦参碱组MDR1基因的相对表达量为0.659±0.074,MRP1基因的相对表达量为0.503±0.058,与空白对照组相比P<0.01);PI3K/AKT信号通路中的PTEN基因表达量逐渐增高而AKT基因的表达量逐渐降低;相同抑制率的苦参碱组(0.6g/L)和MK2206组(0.05μmol/L)相比,两组降低MDR1、MRP1、AKT基因表达量的差异不明显(P>0.05),MK2206组更能增高PTEN基因的表达量。Western blot检测结果显示0.3、0.6、1.2 g/L不同浓度苦参碱干预组与空白对照组相比,随着苦参碱浓度的提高耐药蛋白p-gp、MRP1蛋白表达量逐渐降低(0.6g/L苦参碱组p-gp的相对表达量为0.316±0.033,MRP1的相对表达量为0.134±0.014,与空白对照组相比P<0.01),PI3K/AKT信号通路中的p-AKT蛋白表达量逐渐降低,PTEN蛋白表达量逐渐增高,总AKT基因表达量变化不明显;相同抑制率的苦参碱组(0.6 g/L)和MK2206组(0.05μmol/L)相比,苦参碱组更能降低p-gp、MRP1的蛋白表达量且更能增高PTEN的蛋白表达量,但MK2206组更能降低p-AKT的蛋白表达量,对总AKT蛋白表达量两组差异不明显(P>0.05)。结论苦参碱和化疗药物具有协同作用并具有逆转乳腺癌多药耐药的作用,其机制可能是通过抑制PI3K/AKT通道发挥作用。
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