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乳酸菌广泛分布于自然界,绝大部分是人和动物体内必不可少的具有重要生理功能的正常菌群。乳酸发酵食品是当今世界食品发展的潮流,符合时代的要求,因而具有强大的生命力和广阔的应用前景。目前对乳酸菌的研究已进入分子生物学和基因工程时代,即通过基因工程手段,将外源基因转入乳酸菌中,赋予乳酸菌新的有益性能。但由于乳酸菌属于革兰氏染色阳性菌,具有很厚和致密的刚性细胞壁,致使外源DNA转化进入受体细胞的效率极低,这严重制约了乳酸菌分子生物学的研究和基因工程技术的发展。因此,提高乳酸菌的遗传转化效率是目前乳酸菌分子生物学研究和基因工程发展过程中亟待解决的关键问题。本文以典型的乳酸菌组成型表达质粒pMG36e为载体,以德式乳杆菌保加利亚亚种Lb-MH和乳酸乳球菌ML23为受体,利用电转化方法研究了受体菌株的生长状态与细胞壁处理方式、质粒浓度、电转化参数、复苏培养基组成与复苏培养时间、受体菌株的限制修饰作用对电转化效率的影响,探明了电转化的最适条件,提高了电转化效率。研究结果表明选择含2.5%甘氨酸和0.5 mol/L蔗糖的MRS培养基培养乳杆菌Lb-MH受体细胞约8h左右OD600=0.4～0.6,收获细胞制成感受态细胞,加入1μL浓度为1μg/μL的质粒DNA,在电场强度12 kV/cm,电阻200 ?,电容25μF电击转化,以含有0.5 mol/L蔗糖和20 mmol/L的MgCl2、CaCl2的MRS培养基复苏培养2～3小时,并用亚抑制抗生素浓度选择转化子获得了较高的电转化率,特别是用宿主修饰过的质粒pMG36e进行电转化时,转化效率提高了30倍以上达到6.3×10~4 cfu/μgDNA。而选择含2%甘氨酸和0.5 mol/L蔗糖的MRS培养基培养乳球菌ML23受体细胞约8 h左右OD600=0.3～0.5,收获细胞制成感受态细胞,加入1μL浓度为1μg/μL的质粒DNA,在电场强度11 kV/cm,电阻200Ω,电容25μF电击转化,以含有0.5 mol/L蔗糖和20 mmol/L的MgCl2、CaCl2的MRS培养基复苏培养2~3小时,并用亚抑制抗生素浓度选择转化子获得较高的电转化率,特别是用宿主修饰过的质粒pMG36e进行电转化时,转化效率提高了15倍以上达1.05×10~5 cfu/μgDNA。本实验结果为外源质粒pMG36e电转化乳酸乳球菌ML23和保加利亚乳杆菌Lb-MH提供了可靠的参考依据,为进一步构建乳酸菌组成型高效表达系统和食品级基因工程乳酸菌株以及为乳酸菌分子生物学的研究和基因工程技术的发展,提供了可行的依据。