论文部分内容阅读
肺癌是呼吸系统最常见的恶性肿瘤，NSCLC约占全部肺癌的80～85%。目前，肺癌的主要治疗手段包括手术治疗、放疗、化疗和靶向治疗等，尽管近年来上述治疗措施已取得长足进步，但其复发率和病死率仍很高，总体疗效差，主要原因在于其发病、复发及转移等相关机制尚不明确。肺癌起源于一系列遗传和表观遗传的变化，DNA甲基化和miRNA是表观遗传修饰的主要机制，已成为胸外科的研究热点之一。实验共分为两个部分：第一部分，在肿瘤组织、癌旁组织、正常组织中，评估hOGG1和HYAL1基因启动子甲基化的表达差异，在NSCLC患者和良性对照患者外周血中，评估hOGG1及HYAL1基因启动子甲基化的差异；第二部分，在NSCLC患者与良性对照患者外周血中,评估miRNAs的表达差异能否用于NSCLC的早期诊断，评估外周血中miRNAs的表达差异能否用于预测早期肺癌的复发。第一部分肺癌组织及血浆中HYAL1与hOGG1基因启动子甲基化的状况与临床意义目的：在肿瘤组织、癌旁组织、正常组织中，评估hOGG1和HYAL1基因启动子甲基化的表达差异，在NSCLC患者和良性对照患者外周血中，评估hOGG1及HYAL1基因启动子甲基化的差异;观察hOGG1和HYAL1基因启动子甲基化与NSCLC临床病理因素的关系。方法：评估80例NSCLC肺癌组织，80例癌旁组织，以及20例肺良性病变组织中hOGG1及HYAL1基因启动子甲基化差异，并分析肺癌组甲基化状况与临床病理资料相关关系；评估80例NSCLC患者和20例肺良性病变患者外周血中hOGG1及HYAL1基因启动子甲基化状况；评估10例肺癌组织与相应转移纵隔淋巴结中hOGG1及HYAL1基因启动子甲基化状况。结果：肺癌组织中，HYAL1启动子甲基化的阳性率明显高于正常对照组（48.8%vs10%, p=0.002）；癌旁组织中，HYAL1启动子甲基化的阳性率高于正常对照组（32.5%vs10%, p=0.045）；NSCLC患者血浆中HYAL1启动子甲基化的阳性率显著高于对照组血浆（40%vs5%, p=0.003）。肺癌组织中，hOGG1启动子甲基化的阳性率明显高于正常对照组（52.5%vs15%,p=0.003）；癌旁组织中，hOGG1启动子甲基化的阳性率高于正常对照组，但两者差异无显著性（23.8%vs15%, p=0.587）；NSCLC患者血浆中hOGG1启动子甲基化的阳性率显著高于对照组血浆（42.5%vs10%, p=0.007）。恶性组肺癌组织中HYAL1和hOGG1启动子甲基化率与患者的性别、年龄分组、肿瘤大小、病理类型、组织学分级、T分期均无明显关系(P>0.05)。肺癌组织中，III期组HYAL1启动子甲基化阳性率高于I－II期组（66.7%vs39.6%, p=0.022）；淋巴结阳性组HYAL1启动子甲基化阳性率高于淋巴结阴性组（63.6%vs38.3%,p=0.026）。肺癌组织中，III期组hOGG1启动子甲基化阳性率高于I－II期组（74.1%vs41.5%, p=0.006）；淋巴结阳性组hOGG1启动子甲基化阳性率高于淋巴结阴性组（69.7%vs40.4%, p=0.001）。恶性组血浆中HYAL1和hOGG1启动子甲基化率与患者的性别、年龄分组、肿瘤大小、病理类型、组织学分级、T分期均无明显关系(P>0.05)。恶性组血浆中，III期组HYAL1启动子甲基化阳性率高于I－II期组（66.7%vs26.4%, p=0.001）；淋巴结阳性组HYAL1启动子甲基化阳性率高于淋巴结阴性组（60.6%vs25.5%,p=0.002）；恶性组血浆中III期组hOGG1启动子甲基化阳性率高于I－II期组（59.3%vs34.0%, p=0.030）；淋巴结阳性组hOGG1启动子甲基化阳性率高于淋巴结阴性组，但两者差异无显著性（54.5%vs34.0%, p=0.068）。血浆中HYAL1启动子甲基化阳性用于肺癌诊断的ROC曲线，AUC为0.675(95%的可信区间为56%-79%)。血浆中hOGG1启动子甲基化阳性用于肺癌诊断的ROC曲线，AUC为0.663(95%的可信区间为54.3%-78.2%)。血浆中hOGG1联合HYAL1启动子甲基化阳性用于肺癌诊断的ROC曲线，AUC为0.728(95%的可信区间为61.9%-83.8%)。10例肺癌组织与相应转移纵隔淋巴结比较显示，二者之间HYAL1启动子甲基化状况存在差异4例，二者之间存在hOGG1启动子甲基化状况存在差异4例。结论：hOGG1和HYAL1在NSCLC组织和血浆中存在启动子高甲基化，肺癌组织中hOGG1和HYAL1的启动子高甲基化与NSCLC病理分期和淋巴结转移相关，提示hOGG1和HYAL1的启动子高甲基化可能参与了NSCLC的发生、发展及转移。血浆hOGG1和HYAL1的检测可用于NSCLC的辅助诊断。NSCLC肿瘤内部可能存在肿瘤异质性。第二部分血浆miR-155、miR-182和miR-21对早期非小细胞肺癌诊断价值的研究目的：研究非小细胞肺癌（NSCLC）患者与良性对照患者外周血中miRNAs的表达差异能否用于NSCLC的早期诊断，外周血中miRNAs的表达差异能否用于预测早期肺癌的复发。方法：采用实时荧光定量RT-PCR检测血浆中9种miRNAs（miR-30d，miR-383， miR-223，miR-25，miR-21、miR-126、miR-210、miR-155、miR-182）的表达量，在20例NSCLC患者和20例良性对照组中筛选出可能有诊断价值的miRNAs。在总计135例早期NSCLC和85例良性对照组中，评估miR-21、miR-155以及miR-182的计算其诊断的ROC曲线；随访135例NSCLC患者3年，评估复发组与无复发组miRNAs表达差异。结果：NSCLC组血浆miR-21、miR-155以及miR-182的表达显著高于良性对照组，在miR-21曲线下面积（theAreas under the ROC Curve，AUC）为0.805（95%的可信区间：0.749-0.861），其最佳诊断临界点，诊断敏感性68.1%，诊断特异性78.8%；miR-155曲线下面积为0.821（95%的可信区间：0.767-0.875），其最佳截断点，诊断敏感性81.5%，诊断特异性69.4%；miR-182曲线下面积为0.745（95%的可信区间：0.681-0.809），其最佳截断点，诊断敏感性55.6%，诊断特异性82.4%。将这3种miRNAs联合起来，可更明显地将NSCLC组与良性对照组区分出来，AUC值为0.894（95%可信区间：0.862-0.936），其最佳截断点，诊断敏感性为73.3%，诊断特异性为95.3%。复发组患者血浆miR-21、miR-155以及miR-182的表达显著高于未复发组。结论：血浆miR-21、miR-155以及miR-182可用于NSCLC早期诊断，可以有助于与肺内良性病变相鉴别。miR-21、miR-155以及miR-182升高是早期NSCLC复发的高危因素。