目的:构建Pardaxin多肽修饰的非溶酶体途径转运的新型阳离子脂质体Pardaxin liposome(Par-lipo)。将其应用于干细胞的转染和肿瘤细胞的基因编辑,对Par-lipo在这两个过程中的具体转运方式进行研究,通过分析转染效率和编辑效率来对其体内外基因递送能力进行评价。方法:采用薄膜分散-探超法制备新型阳离子脂质体Par-lipo。通过透射电镜(TEM)和动态光散射(DLS)对Par-lipo进行表征。通过对琼脂糖凝胶电泳(AGE)结果和不同质量比下复合产物的粒径电位的分析,来考察Par-lipo与核酸通过静电吸附结合的能力。选用EGFP作为报告基因,通过转染编码该基因的质粒pEGFP来考察Par-lipo在干细胞上的基因递送效率。接着以GFP为靶基因,利用CRISPR/Cas9基因编辑系统构建GFP敲除质粒,通过分析Par-lipo介导的敲除率来考察其体外递送基因编辑系统的效率。并通过T7EI来验证敲除结果。采用荧光定位的方法对Par-lipo在基因编辑时的胞内转运途径进行研究。选择细胞周期蛋白6(CDC6)为内源靶基因,针对其高表达的两种肿瘤模型:乳腺癌和肝癌,进行体内敲除实验,来考察Par-lipo对肿瘤细胞进行体内基因编辑的效率,并对其抗肿瘤效果进行评价。结果:Pardaxin的修饰不仅赋予了脂质体非溶酶体途径的转运方式,还可以增加干细胞对脂质体的摄取,显著提高了转染效率;Par-lipo在CRISPR/Cas9基因编辑系统的递送中,不仅可以直接将携载的CRISPR/Cas9质粒递送到内质网,还可以将游离的核酸富集到内质网,保护sgRNA的完整性,促进它与Cas9核酸酶在核周结合,有利于Cas9/sgRNA编辑复合物回到细胞核执行功能,以获得高效的基因编辑。结论:Par-lipo在细胞内可以经非溶酶体途径转运,这一行为显著提高了干细胞转染效率和体内外基因编辑效率。因此,Par-lipo在基因治疗中有很大的应用前景。