胃癌是严重影响人们身体健康的常见恶性肿瘤之一,除了外科手术及放疗外，细胞毒类药物化疗是胃癌治疗的重要手段，但由于治疗作用缺乏特异性以及长期用药导致的耐药性，影响了细胞毒类药物的治疗效果，从而限制了其临床应用。目前，胃癌患者总的预后改善有限，进展期胃癌患者术后五年生存率除日本外仍在30℅左右。恶性肿瘤细胞由于基因调控异常，细胞分化成熟障碍，因而表现出无限增殖的特性。20世纪70年代，Sachs发现在抑制增殖和诱导分化的物质作用下,小鼠白血病细胞系的异常分化是可逆的，并由此提出了分化治疗（differentiation therapy）的概念，作为恶性肿瘤治疗的新型治疗方法，诱导分化治疗已经引起广泛关注。全反式维甲酸（all trans retinoic acid, ATRA）是临床常用的分化诱导剂，可与细胞核内维甲酸受体（RARs）或维甲酸X受体（RXRs）结合，进一步作用于DNA基因启动子区域内维甲酸反应原件（RARE），调节基因表达，引起细胞生长抑制，诱导细胞分化或凋亡，发挥生物学效应。目前， ATRA已成为治疗急性早幼粒细胞白血病首选药物，并广泛应用于乳腺癌、甲状腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌及宫颈癌等实体肿瘤的预防和治疗，但维甲酸类化合物对胃癌的治疗作用尚处于研究阶段。而且ATRA诱导分化治疗急性早幼粒细胞白血病过程中可出现维甲酸综合征等副作用，或无效及耐药，限制了临床进一步应用。因而，开发疗效更好、副作用更少的维甲酸类化合物已经成为诱导分化治疗的热点之一。本课题组前期研究中以ATRA为先导化合物合成了系列全反式维甲酸衍生物并进行了抗肿瘤活性筛选，其中4-氨基-2三氟甲基苯基维甲酯（4-anino-2-trifluoromethyl-phenyl retimate,ATPR）对白血病细胞具有良好的诱导分化作用。本课题在前期研究的基础上进一步观察全反式维甲酸对胃癌的治疗作用，并探讨全反式维甲酸的衍生物ATPR对胃癌细胞的作用及机制，旨在为开发高效低毒的维甲酸衍生物提供实验依据。目的1.探讨胃癌RARs/RXRs表达及维甲酸治疗对胃癌患者手术后预后的影响2.探讨ATRA的衍生物ATPR对胃癌细胞的作用及机制，为胃癌诱导分化治疗寻找新的药物。方法1.免疫组化法分析胃癌组织中RARs/RXRs表达，Pearson’s χ²检验分析其与胃癌临床病理因素的相关性，Cox回归分析147例胃癌患者术后总生存时间的影响因素，进一步应用Kaplan–Meier法分析147例胃癌患者术后总生存时间与RARa阳性表达关系2.对入选80例胃癌患者进行维甲酸治疗临床试验:维甲酸口服，45mg/m²，共六月,Kaplan–Meier法及寿命表法分析维甲酸治疗对胃癌患者生存时间的影响。3. Western-blotting法检测三株胃癌细胞:MKN-45、 MKN-74、 NCI-N87RARs/RXRs表达4. MTT法分析ATPR对胃癌细胞(MKN-45、 MKN-74、 NCI-N87的作用。5.荧光素酶报告基因分析ATPR对RAR或RXR结合的选择性。6.流式细胞分析ATPR或ATRA作用胃癌细胞MKN-45、MKN-74、NCI-N8772小时后对细胞周期、凋亡的影响。7. Western-blotting法检测ATPR5uM作用胃癌细胞MKN-45、MKN-74、NCI-N8772小时后对癌胚抗原（CEA）表达的影响。8.实时荧光定量PCR及Western-blotting法检测ATRA及ATPR对胃癌细胞RARs/RXRs表达的影响。9.分光光度法检测ATPR5uM作用胃癌细胞MKN-45、MKN-74、NCI-N8772小时后对碱性磷酸酶（ALP）和Kaplan–Meier法乳酸脱氢酶（LDH）活性影响。结果1.RARs/RXRs在正常胃粘膜组织、胃癌组织及胃癌细胞株中均有表达, RXRβ在胃癌及正常粘膜组织中均较少表达,免疫组化未见强阳性；胃癌中RARs与RXRs的之间表达有正相关性。2. RARβ、RARγ、RXRa与胃癌AJCC的TNM分期相关，分期越晚其表达越低（P<0.05）；RARa, RARβ与胃癌分化程度有关，分化越差表达越低（P <0.05）。3. RARa与AJCC的TNM分期是胃癌独立预后因素，RARa阳性表达胃癌患者，其总生存时间显著延长（hazard rate，HR=0.42），口服维甲酸治疗六月能显著延长胃癌患者手术后总生存时间（HR=0.41）。4. ATPR对胃癌细胞MKN45、MKN74、NCI-N87有明显生长抑制作用（P <0.05），其抗肿瘤作用呈时间及剂量依赖性，用药48后效应明显，用药72小时ATPR对胃癌细胞增殖抑制的IC50是3.0uM～6.2uM，ATRA对胃癌细胞增殖抑制的IC50在6.6uM～8.5uM。在100uM时对正常细胞SVHUC细胞的生长抑制效应明显低于ATRA对SVHUC细胞的生长抑制效应。5.荧光素酶报告基因结果表明，发光值_{RARE-TK-LUC+RARa+ATPR}大于发光值_{RARE-TK-LUC+RARa}、发光值_{RARE-TK-LUC+RXRa}及发光值_{RARE-TK-LUC+RXRa+ATPR}（P<0.05），提示ATPR与RAR结合的选择性更好，ATPR是与RAR结合，而不与RXR结合。发光值_{RARE-TK-LUC+RXRa+RARa+ATPR}大于发光值_{RARE-TK-LUC+RARa+ATPR}（P<0.05），提示ATPR与RAR/RXR异二聚体结合力大于ATPR单独与RAR的结合力。6. ATPR（5,10uM）体外给药72h，可导致NCI-N87胃癌细胞subG1期细胞显著增多（P<0.05）；ATPR（10uM）体外给药72h，可导致MNK-45及MKN-74细胞subG1细胞数显著升高（P<0.05）。7. ATPR（5uM）体外给药72h， MKN-45、MKN-74和NCI-N87胃癌细胞的凋亡细胞率分别为36.8%、41.3%及46.5%。 ATRA（5uM）体外给药72h， MKN-45、MKN-74和NCI-N87凋亡细胞率分别36.0%、36.1%及35.7%。8.与对照组比较，ATPR（5uM）体外用药72h可导致MKN-45和MKN-74细胞CEA表达显著减少（P<0.05），但对NCI-N87细胞CEA表达无显著影响（P>0.05）。9.与对照组比较，ATPR（5uM）体外用药72h，MKN-45、MKN-74、NCI-N87胃癌细胞的RARa mRNA表达显著升高（P<0.05）。10.与用药前比较， ATPR（5uM）体外用药72h后MKN-45、MKN-74、NCI-N87胃癌细胞的RARa蛋白表达显著升高（P<0.05）。11.与对照组比较，ATPR（5uM）体外用药72h，MKN-45、MKN-74、NCI-N87胃癌细胞中碱性磷酸酶（ALP）和乳酸脱氢酶（LDH）活力显著降低（P<0.05）,且与ATRA比较，ATPR处理后引起ALP及LDH的活力降低更显著（P<0.05）。结论1.RARa是胃癌的阳性预后因子,可作为胃癌细胞分化的标志物之一, RARa表达阳性胃癌患者联合维甲酸治疗可以有效延长胃癌患者手术后生存期, ATRA对胃癌有一定的治疗作用。2. ATRA及其衍生物ATPR具有抗胃癌作用， ATPR对胃癌的治疗作用机制与其诱导胃癌细胞分化及诱导胃癌细胞凋亡及引起胃癌细胞周期阻滞有关。在胃癌细胞分化较差时，ATPR更易诱导细胞分化，在胃癌细胞分化较好时，ATPR更易诱导细胞凋亡。3.ATPR抗胃癌的分子生物学基础可能是依赖维甲酸信号传导通路：RAR与RXR形成异二聚体, ATPR是RAR的激动剂,与RAR结和后形成ATPR/RAR/RXR复合物，复合物作用于基因的RARE,调节控制与细胞分化及细胞凋亡相关基因的表达，诱导细胞分化及凋亡。4. ATPR对胃癌细胞的抗肿瘤作用优于ATRA，对正常细胞抑制作用小。在3.0～6.2uM时对分化差的胃癌细胞具有更好的诱导分化能力，新型维甲酸类药将是胃癌诱导分化治疗中一种有效的治疗药物。