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2,,5’-寡腺苷酸合成酶(2’,5’-Oligoadenylate Synthesis,OAS)是一种干扰素(IFN)诱导产生的在先天免疫过程中发挥抗病毒作用的蛋白,属于干扰素调节因子(ISGs),由于其多具有合成2-5寡腺苷酸(2-5A)的能力而被归类统称为OAS家族成员,它们能够激活细胞内源性的RNase L,RNase L核酸酶降解病毒和细胞的RNA以此发挥抗病毒效应。OASs同时也参与细胞的调亡、细胞生长与分化、肿瘤的发生调节等生物进程。OAS广泛地存在于哺乳动物各类组织中,对于其生物学功能的研究报道也愈来愈深入。猪源OAS家族基因包括OAS1(OAS1a和OAS1b)、OAS2和OASL,缺少OAS3,分布于15号染色体上。猪源OAS的氨基酸序列与人源、鼠源OAS具有高度的同源性,都能由干扰素诱导产生。人源OASL(hOASL)不具有合成2-5寡腺苷酸(2-5A)的能力,属于非典型OAS,其C端的泛素样区域(Ubiqutin-like domain,UbLD)对于其发挥抗病毒效应扮演重要的角色。猪源OASL(pOASL)与hOASL相比,由于蛋白翻译提前终止而缺乏C端典型的UbLD。研究表明,pOASL也具有抗JEV的活性,因此pOASL与hOASL可能通过不一样的途径发挥抗病毒效应。基因结构分析表明,pOASL与hOASL的OAS-Like区域存在高度的同源性,hOASL的OAS-Like区域在OASL发挥抗病毒效应中增强了与dsRNA结合的强度,从而增强其抗病毒效应,然而OAS-Like区域在pOASL发挥功能中所扮演的角色尚不清楚。日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV),为单股正链RNA病毒,属于黄病毒科黄病毒属。在亚洲范围内,JEV是导致人类神经性疾病的重要病原,统计每年约有70000例感染JEV,且近有10000例发生死亡。和其它的黄病毒科成员一样,JEV由蚊虫传播,其自然传播循环包括鸟类和家畜。家畜动物中的广泛传播导致家畜连续发生疾病,从一些动物的感染症状发展的到其他动物的急性神经症状。JEV感染对于猪的影响尤其严重,尽管成年猪的感染不发生明显的症候疾病,但却对其生殖造成严重威胁,比如母猪的流产、死胎和畸形胎等,感染仔猪会发生致命的神经性疾病。因此深入研究宿主对JEV的抵抗机制对于研制有效的抗JEV药物具有重要意义。1.猪源OASL新型剪接变体的发现与鉴定2’,5’-寡腺苷合成酶是干扰素诱导的抗病毒蛋白,是哺乳动物先天性免疫系统的重要成分。本研究通过RT-PCR扩增发现猪源OASL的新型剪接变体(pOASL2),OASL2与野生型猪源OASL(pOASL·)不同的是其基因缺失第4外显子以及与之相连的第5外显子上8个核苷酸,并且发生提前终止,基因长度为633 bp。制备针对pOASL1与pOASL2共同部分的兔源多克隆抗血清(anti-pOASL PAb),anti-pOASL PAb能够特异性识别pOASL免疫原蛋白,并且能识别外源真核表达的pOASL1与pOASL2。Western blotting检测到PK-15细胞经IFN-β刺激能产生pOASL的不同剪接变体。2.猪源OASL新型剪接变体抗日本脑炎病毒感染的研究2’,5’-寡腺苷酸合成酶L(OASL)具有抗病毒活性,但是缺乏2-5寡腺苷酸合成酶活性,是OAS家族中非典型成员。pOASL2在PK-15细胞或者Vero细胞中瞬时表达能够抑制日本脑炎病毒(JEV)的增殖,且效果与pOASL1相当。此外,pOASL·与pOASL2还能够抑制蓝耳病病毒(PRRSV)和水疱性口炎病毒(VSV)的增殖,但是不能抑制伪狂犬病病毒(PRV)的增殖。hOASL中的αN4螺旋对于hOASL的抗病毒效应具有重要作用,hOASL与pOASL的OAS样结构一致。依据人源OASL结构域的构成,突变构成pOASL2 αN4螺旋的关键氨基酸后,pOASL2仍然具有抗JEV的活性。综上,猪源OASL2作为新型OASL剪接变体,具有抑制RNA病毒感染的活性,其抗病毒机制仍需要进一步研究。