手术应激可导致免疫功能的损害，表现为淋巴细胞数量的减少、粒细胞功能受抑制等。研究发现细胞凋亡过程的无序激活与手术创伤引起的细胞免疫抑制有一定的联系，而线粒体在细胞的凋亡中发挥着重要的作用。通过对经历手术和麻醉应激的患儿外周血淋巴细胞和中性粒细胞线粒体功能的检测，探讨线粒体介导的细胞凋亡在手术应激中的意义。 一、手术应激后儿童外周血淋巴细胞凋亡及线粒体功能变化 目的：探讨手术应激后儿童外周血淋巴细胞的凋亡及线粒体功能变化。 方法：选择择期手术患儿16例，分别于术前24小时、术后24小时、术后72小时采集外周静脉血3.5--5ml。用梯度离心法分离出淋巴细胞，置于RPMI-1640培养基中，培养15小时。加入藻红蛋白标记的抗CD4~+、CD8~+作标记，分等量两份分别加入20ug／ml的7-AAD、40nmol／L的DioC6(3)在4℃避光20分钟染色。再加入20ug／ml放线菌素D，1％的多聚甲醛，4℃下保存20分钟固定。然后通过流式细胞仪检测细胞凋亡和线粒体膜电位的变化。 结果：发现术后24小时CD4~+、CD8~+淋巴细胞凋亡率明显增加(术前分别为1.97±0.45、2.47±0.27，术后为3.50±0.42、4.26±0.53，P＜0.05)。术后72小时又恢复至术前水平(1.67±0.22、2.70±0.38，P＞0.05)。同手术应激后儿童外周血淋巴细胞、中性粒细胞调亡及线粒体功能变化及临床怠义中文提要时荧光指数明显增加(术前分别为503.31士59.43、381.67士61.15，术后为700.4一士59.12、645.86士69.58，P<0.05)，术后72小时恢复至术前水平(52 1 .62士68.05，43 1 .07士79.26，P)0.05)。 二、手术应激后儿童外周血中性粒细胞凋亡及线粒体功能变化 目的:探讨手术应激后儿童外周血中性粒细胞的凋亡及线粒体功能变化。 方法:选择择期手术患儿16例，分别于术前24小时，术后24小时，术后72小时采集外周血3.5一5ml加入肝素。用梯度离心法分离出中性粒细胞，置于RPMI一1 640培养基中，培养巧小时。分等量两份分别加入Zougzml的7一AAn、4onmol几的Dioe6(3)在4oC避光20分钟染色。再加入20ug/ml放线菌素D，1%的多聚甲醛，4oC保存20分钟固定。通过流式细胞仪检测细胞凋亡和线粒体膜电位的变化。 结果:发现术后24小时中性粒细胞凋亡率明显减少(术前13.27士.90，术后(5 .47士0.717.55士1.26，P<0.05)，而且术后72小时仍处于减少状态P<0.05)。同时荧光指数也下降(术前46.08士7.80、术后30.72士4.23，p<0.05)。术后72小时仍处于减少状态(29.63士5.98，p<0.05)。 三、结论:l)手术应激使儿童外周血CD4+、CDS+淋巴细胞凋亡增加，同时荧光指数升高。表明有较多细胞线粒体膜电位下降。这种变化是短暂的，术后72小时恢复至术前水平，可能是机体免疫功能降低的原因。2)手术应激使儿童外周血PMN凋亡减少，同时荧光指数降低。表明有较少细胞线粒体膜电位降低。PMN凋亡的延迟可能是术后炎症反应综合症的原因之一。3)外周血淋巴细胞、中性粒细胞凋亡和线粒体功能 l!手术应激后儿童外周血淋巴细胞、中性粒细胞凋亡及线粒体功能变化及临床意义中文提要的变化可能是手术应激所致全身免疫反应的一部分。