奶牛乳腺炎是一种影响全球乳制品行业健康发展的疾病。引起奶牛乳腺炎的主要病因是环境病原微生物感染和生理创伤或相关代谢途径改变。大肠杆菌能够诱发奶牛发生急性乳腺炎,其毒力成分脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）注入乳腺可引起乳腺的免疫反应。n-3多不饱和脂肪酸（n-3 polyunsaturated fatty acids,n-3 PUFAs）作为机体重要的脂质营养素,是人类和动物所必需的脂肪酸,通过产生各种不同脂类代谢产物调控细胞内信号通路,在多种炎症疾病中发挥着有益作用。本研究通过体内外乳腺炎模型,研究了n-3 PUFAs对LPS诱导炎性反应的抑制作用及其可能的分子机制。在细胞试验水平,通过LPS处理奶牛乳腺上皮细胞建立了奶牛乳腺炎的细胞模型,以n-3 PUFAs在LPS刺激细胞前进行预处理,采用实时荧光定量聚合酶链式反应和酶联免疫吸附试验检测炎性细胞因子,包括肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素1β（Interleukin-1β,IL-1β）和白介素6（Interleukin-6,IL-6）的m RNA表达和蛋白分泌水平,研究了n-3 PUFAs对LPS对乳腺上皮细胞炎性诱导的作用。结果显示,LPS可明显诱导乳腺上皮细胞对TNF-α、IL-1β和IL-6 m RNA表达和蛋白分泌水平的增加,而n-3 PUFAs预处理可减轻LPS诱导的这些炎性细胞因子的分泌。通过双荧光素酶报告试验、免疫荧光试验和蛋白印迹技术等研究了n-3 PUFAs是否通过调控NF-κB炎性信号通路进而抑制LPS诱导的乳腺上皮细胞炎性反应。双荧光素酶报告试验结果显示,n-3 PUFAs预处理明显抑制LPS对于NF-κB通路的活化。免疫荧光试验结果显示,LPS能够增强磷酸化P65入核,而n-3 PUFAs预处理能够减弱磷酸化P65入核。蛋白印迹试验结果显示,n-3 PUFAs预处理降低了LPS诱导炎性状态下My D88、p-IκB-α/IκB-α、p-P65/P65和P50通路蛋白的表达。这些结果表明n-3 PUFAs通过抑制NF-κB的激活进而抑制LPS诱导的乳腺上皮细胞炎性反应。在动物试验水平,通过LPS乳腺注射的方式建立了小鼠乳腺炎模型,以n-3 PUFAs灌胃小鼠预处理,通过一系列生化和分子生物学的方法,包括病理组织学检查、血液白细胞计数计算、血清中碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）活性、降钙素原（Procalcitonin,PCT）和C-反应蛋白（C-reactive protein,CRP）含量的检测,以及乳腺组织中NF-κB信号通路相关蛋白的表达检测等,研究了n-3 PUFAs对LPS诱导的乳腺炎症反应的保护作用及机制。结果显示,LPS可明显诱导小鼠乳腺组织发生广泛的乳腺腺泡内白细胞浸润,外周血白细胞数量下降,碱性磷酸酶活性降低,以及乳腺组织内炎性通路NF-κB的激活;而n-3 PUFAs干预明显减弱了LPS诱导的小鼠乳腺组织炎症反应。此外,小鼠肠道内容物16S r DNA Amplicon测序分析结果显示,LPS诱导明显改变小鼠肠道菌群结构,导致亚优势菌属结构发生变化;而n-3 PUFAs提前干预改善了LPS刺激引起的小鼠肠道亚优势菌属的结构紊乱。综上所述,n-3 PUFAs预处理通过抑制NF-κB信号通路的激活以及维持肠道菌群的稳态能够减轻由LPS诱导的乳腺上皮细胞及小鼠乳腺组织的炎症反应。