【摘 要】
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研究背景白血病是一种常见的起源于造血前体细胞的恶性肿瘤,在我国发病率较高,目前主要的治疗方法为造血干细胞移植和化疗。化疗是目前治疗白血病的主要手段,然而化疗的副作用及多药耐药的产生,给临床治疗白血病预期的完全缓解和巩固治疗带来了诸多困难。中药作为我国传统治疗白血病的手段,具有个体化、辩证施治的明显优势,实践证明中医中药在治疗白血病中显示出重要作用。近年来随着中药及其有效成分抗白血病的临床及实验研究
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研究背景白血病是一种常见的起源于造血前体细胞的恶性肿瘤,在我国发病率较高,目前主要的治疗方法为造血干细胞移植和化疗。化疗是目前治疗白血病的主要手段,然而化疗的副作用及多药耐药的产生,给临床治疗白血病预期的完全缓解和巩固治疗带来了诸多困难。中药作为我国传统治疗白血病的手段,具有个体化、辩证施治的明显优势,实践证明中医中药在治疗白血病中显示出重要作用。近年来随着中药及其有效成分抗白血病的临床及实验研究日益广泛,部分研究发现温阳中药中的有效成分可以改变白血病细胞的生物学活性,诱导白血病细胞成熟分化和凋亡。半夏是传统中草药材,内含多种有效活性成分,半夏提取物和生物总碱抑制白血病细胞增殖有相关的研究,但其具体作用机制缺乏研究。目的探索半夏提取物有效成份对白血病细胞增殖的抑制作用和诱导细胞凋亡的作用,探寻其分子水平的作用的机制;探讨半夏提取物在白血病治疗中可能的应用价值。研究方法用氯仿低温超声方法提取半夏有效成分,分别制备100,200,300,400,500ug/ml5种浓度,作用于3种白血病细胞株。观察半夏提取物处理髓系白血病细胞K562、HL60和淋巴系白血病细胞C8166细胞的形态学改变;CCK-8法检测半夏提取物对3种白血病细胞增殖的抑制作用;Annexin V/PI双染流式细胞术检测半夏提取物处理对3种白血病细胞凋亡的诱导作用;实时荧光定量PCR检测半夏提取物对3种白血病细胞检测Bax、Bcl-2和Caspase-3基因表达量,免疫印迹检测半夏提取物对3种白血病细胞相关凋亡蛋白表达的影响。研究结果1.CCK-8法检测结果显示:半夏提取物处理对3种白血病细胞的增殖均有较强的抑制作用,且在500ug/ml浓度下半夏提取物诱导凋亡作用最为稳定。2.Annexin V/PI双染流式细胞术检测显示:随着半夏提取浓度的增加,3种白血病细胞凋亡比率逐渐升高。300ug/ml和500ug/ml作用72h,凋亡率明显高于对照组,表明半夏提取物处理可以诱导3种白血病细胞发生凋亡,提示半夏提取物对白血病细胞增殖的抑制作用可能是由于半夏提取物促进白血病细胞凋亡。3.实时荧光定量PCR显示:半夏提取物作用3种白血病细胞72h后,与对照组比较明显提高了Bax,Caspase-3 mRNA的表达量,降低了Bcl-2 mRNA的表达量（P<0.05）。4.蛋白免疫印迹显示:半夏提取物作用3种白血病细胞72h后,能上调促凋亡蛋白Bax,下调抗凋亡蛋白Bcl-2,同时激活下游信号蛋白Caspase-3表达。结论1.半夏提取物在500ug/ml浓度时,抑制白血病细胞增殖、促进细胞凋亡作用最为明显,且在48～72小时的抑制生长曲线、凋亡蛋白表达最为稳定。2.半夏提取物对白血病细胞的作用机制可能为上调Bax基因表达、下调Bcl-2基因表达;以及影响下游基因Caspase-3 mRNA的表达来抑制白血病细胞增殖,促进其凋亡。
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