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目的:研究黄苓素(5,6,7-三羟基黄酮,Baicalein)对H2O2及VitK3引起的人视网膜Müller细胞氧化损伤的保护作用,探讨Baicalein在年龄相关性黄斑变性(Age Related Macular Degeneration,AMD)防治中的应用可能性。
方法:体外培养人视网膜Müller细胞系MIO-M1细胞,待接种细胞生长接近融合时分为4组接种铺板实验:空白对照组(正常培养)、过氧化氢(H2O2)组,Baicalein组、Baicalein+H2O2组。空白对照组:培养液换为不含血清的DMEM培养基;H2O2组:以含有H2O2(浓度分别为10、20、40、60、80、100μmol/L)的无血清DMEM培养液继续培养24小时,寻找合适的H2O2浓度,用以造成氧化损伤模型;Baicalein组:以含有Baicalein(浓度分别为0.5、1、2、5、10、20、50μmol/L)的无血清DMEM培养液,继续培养24小时,检测Baicalein对细胞生长的影响;H2O2+Baicalein组:以含有Baicalein(浓度分别为0.5、1、2、5、10、20、50μmol/L)的无血清DMEM培养液预作用1小时,加入根据H2O2组实验结果选定浓度(8μmol/L)的H2O2,继续培养24小时,以MTT法检测细胞活性,从而评价细胞氧化损伤的变化情况。Baicalein对维生素K3(vitaminK3,VitK3)引起的人视网膜Müller细胞氧化损伤的保护作用实验方法参照上述方法,VitK3的实验浓度为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10μmol/L。
结果:1.H2O2组与空白对照组相比较,MIO-M1细胞的活性随H2O2浓度增加而降低,从浓度40μmol/L开始差异具有统计学意义;H2O2浓度为80μmol/L时细胞活性为空白对照组的47.12%,选作下一步的实验浓度。Baicalein组与空白对照组比较,MIO-M1细胞活性在小于等于10μmol/L无明显统计学差异,即MIO-M1对细胞的增殖无明显影响,20μmol/L后细胞的活性随Baicalein浓度增加而降低,并具有统计学意义。过氧化损伤实验中,Baicalein干预组的细胞活性较H2O2组升高,在Baicalein浓度为1~20μmol/L时,差异具有统计学意义;在Baicalein5μmol/L浓度时活性最高。2.VitK3组与空白对照组相比较,MIO-M1细胞的活性随VitK3浓度先增加而后降低,浓度为4μmol/L及5μmol/L时细胞活性增高,差异具有统计学意义;VitK3自7μmol/L起细胞活性下降,浓度为8μmol/L时细胞活性为空白对照组的54.12%,选作下一步的实验浓度。Baicalein干预组的细胞活性较VitK3组升高,在Baicalein浓度为2μmol/L、5μmol/L、10μmol/L时,差异具有统计学意义;在Baicalein为5μmol/L浓度时活性最高。
结论:Baicalein对H202及VitK3诱导的MIO-M1细胞的氧化损伤有保护作用。