背景及目的乳腺癌因其具有极高的发病率和致死率,成为最常见的和最有研究意义的高异质性肿瘤之一。近年来,虽然乳腺癌的诊断和治疗水平随着医疗条件的发展而显著提高,乳腺癌的致死率明显降低,但乳腺癌仍是全球女性死亡的主要因素。目前,由于乳腺癌患者尤其是恶性乳腺癌中晚期患者的常规临床治疗仍存在易复发、易转移、产生抗药性和对毒副作用大等多种不确定因素,因此筛选确定乳腺肿瘤标志分子对于早期诊断、病人个体化靶向治疗及判断病人预后有着至关重要的意义。天冬氨酸β-羟化酶(aspartateβ-hydroxylase,ASPH)通过催化含表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)样结构域的蛋白质中的天冬氨酸/酰胺残基的翻译后羟化反应而参与细胞运动和分化。近期研究表明,ASPH能够通过多种信号通路参与疾病的发生,在人类某些恶性疾病包括乳腺癌的发病机制中承担着重要作用,但其能否作为乳腺癌标志分子尚存在争论。目前为止ASPH在乳腺癌患者发病机制中承担的作用尚不清楚,仍需要科学家们进一步深入的研究。在此研究中,我们通过探究临床病理特征与ASPH表达之间的关联,初步探究ASPH在乳腺癌的作用。白细胞分化抗原109(cluster of differentiation 109,CD109)在参与某些恶性肿瘤发病过程中起着关键作用。最新研究表明,CD109在TGF-β,EGF和STAT3信号转导中作为调节因子起重要作用,并且发现CD109可以通过JAK-STAT3和EGFR-AKT-mTOR途径促进肿瘤侵袭及转移,在多种人类的癌症中起致癌作用。然而,CD109在乳腺癌肿瘤发生中的功能作用仍未明确。我们通过探究临床病理特征与CD109表达之间的关联,初步探究CD109在乳腺癌中的作用。实验方法收集乳腺癌患者手术切除的组织样本,应用免疫组织化学染色和免疫印迹检测ASPH和CD109蛋白表达水平,应用荧光定量PCR法检测CD109mRNA表达水平,分别分析ASPH和CD109表达水平与病理特征及现有的乳腺癌标志分子之间的相关性。使用Oncomine数据库探讨mRNA表达水平与乳腺癌分子分型和病理分期之间相关性,使用GEPIA数据库判断ASPH的表达与预后的关系。实验结果第一部分:从患者电子病历中获得病人临床信息,结合本次实验结果进行相关数据统计分析。结果显示:在68例乳腺癌患者的样本组织,ASPH蛋白的阳性表达率在肿瘤组织中占83.33%,而在邻近正常组织中所占的比例率为35.71%,并且相比较于原位癌ASPH在浸润性乳腺癌中强阳性更明显。ASPH蛋白的表达强度分布与年龄(P=0.249)、癌症类型(P=0.935)、分子分型(P=0.484)、ER(P=0.847)、PR(P=0.683)、HER-2(P=0.457)、Ki-67(P=0.147)、p63(P=0.988)、CK5/6(P=0.598)和EGFR(P=0.41)等无显著相关性;但与肿瘤直径大小(P=0.004)、肿瘤临床TNM分期(P=0.000)及淋巴结是否发生转移(P=0.006)等相关指标具有显著相关性(P<0.05)。9位乳腺癌患者新鲜组织(乳腺癌组织和癌旁组织)的免疫印迹结果也证实了ASPH蛋白表达与肿瘤临床TNM分期相关(P<0.05)。Oncomine数据库分析ASPH mRNA表达与乳腺癌类型、肿瘤临床TNM分期和分子分型等病理指标的关系,结果显示,对比在浸润性乳腺癌和原位乳腺癌中的表达,ASPH mRNA在浸润性乳腺癌中表达水平更高,并且ASPH mRNA在肿瘤各TNM分期中的表达量存在明显差异,而在不同分子亚型中的表达水平相差不大。分析GEPIA数据库中1070例乳腺癌样本的ASPH基因表达,发现ASPH高表达患者的总生存期较ASPH低表达的患者差。总之,ASPH的过表达与乳腺癌患者的病理分期及不良预后密切相关,表明其可能与E-cadherin共同通过上皮-间充质转化途径调节乳腺癌的发展,可能是潜在的早期乳腺癌诊断、预后及靶点治疗的辅助标志物。第二部分:在70例乳腺癌患者的样本组织免疫组织化学染色结果显示:CD109的表达分布与年龄(P=0.193)、癌症类型(P=0.142)及淋巴结是否转移(P=0.169)等无显著相关性,与肿瘤直径大小(P=0.001)、远处转移(P=0.011)、临床TNM分期(P=0.002)、分子分型(P=0.000)、ER(P=0.010)、PR(P=0.045)、HER-2(P=0.031)及EGFR(P=0.022)等指标具有显著相关(P<0.05)。12位乳腺癌患者的新鲜组织(乳腺癌组织和癌旁组织)免疫印迹结果表明CD109蛋白表达与乳腺癌TNM分期和分子亚型相关(P<0.05)。Oncomine数据库分析结果表明,CD109 mRNA高表达与晚期肿瘤的高度侵袭性的表型有关。总之,CD109在一些预后较差、易发生转移的恶性程度高的乳腺癌中的表达水平较高,且与乳腺癌的增殖和转移有关,因此认为CD109可能是三阴性或者基底样型等恶性程度高的乳腺癌的早期诊断的辅助标志物和新型药物治疗靶点。