针刺对乳腺增生模型大鼠Fas/FasL凋亡通路影响的实验研究

来源 :辽宁中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangjunfeng_1988
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目的:本研究以针刺膻中、足三里、太冲穴为干预手段,观察大鼠乳腺组织形态学变化,乳腺组织中死亡受体Fas及其配体FasL的蛋白相对含量变化情况,以及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-8、Caspase-3)mRNA的表达情况,旨在从死亡受体Fas/FasL凋亡途径角度探讨针刺膻中、足三里、太冲对乳腺增生大鼠的调控机制,部分阐明其在乳腺增生发生发展过程中的作用机理。材料与方法:40只SPF级雌性SD大鼠,健康未孕,将其随机分成正常组、模型组、针刺组和三苯氧胺组,每组各10只。经适应性饲养后及造模后,对各组大鼠进行为期4周的实验干预。正常组:每日抓取一次;模型组:将大鼠固定在兔台上15 min,日一次;针刺组:将大鼠固定在兔台上,针刺膻中、足三里、太冲穴15 min,日一次;三苯氧胺组:他莫昔芬水溶液灌胃,1.8 mg/kg,日一次。治疗结束后,各组大鼠断食不断水24 h,测量大鼠体重,麻醉,取每组大鼠的第2、3对乳房乳腺组织,第2对固定过夜,用于HE染色观察组织形态,其他存于EP管中,-80℃冰箱中保存备用。采用免疫组化方法及Western Blot法检测大鼠乳腺组织中Fas和FasL的蛋白表达情况,并计算其光密度值;采用qPCR法检测大鼠乳腺组织中Caspase-8和Caspase-3 mRNA的表达情况。结果:1.各组大鼠乳腺组织形态正常组:乳腺组织中小叶数量少,腺泡形态较好,排列整齐,未见腔壁增厚,内部无分泌物存在或较少,导管直径小,未见扩张现象;模型组:较正常组乳腺小叶明显增多,腺泡形态结构不规整,腔壁明显增厚,内部可见大量分泌物出现,导管出现明显扩张,腔内可见大量分泌物,脂肪与结缔组织数量减少;针刺组:较模型组乳腺小叶数量减少,腺泡形态规整,排列整齐,腔壁增厚明显减轻,分泌物明显减少,导管扩张减轻;三苯氧胺组观察结果同针刺组。2.各组大鼠乳腺组织Fas和FasL蛋白表达情况正常组大鼠乳腺组织中Fas呈强阳性表达,FasL呈阴性或弱阳性表达。与正常组相比,模型组大鼠乳腺组织Fas呈弱阳性表达,蛋白表达含量显著降低(P<0.01);FasL呈强阳性表达,蛋白表达含量显著增高(P<0.01)。与模型组相比,针刺组和三苯氧胺组Fas呈阳性表达,蛋白表达含量均显著升高(P<0.05,P<0.01);FasL呈弱阳性表达,蛋白表达含量显著降低(P<0.05,P<0.01)。针刺组和三苯氧胺组比较,二者差异无统计学意义。3.各组大鼠乳腺组织Caspase-8和Caspase-3 mRNA表达情况与正常组相比,模型组Caspase-8、Caspase-3 mRNA表达量均显著降低(P<0.01);与模型组相比,针刺组、三苯氧胺组Caspase-8、Caspase-3 mRNA表达量均显著升高(P<0.01),差异均具有统计学意义。针刺组和三苯氧胺组比较,二者差异无统计学意义。结论:1.针刺“膻中”、“足三里”、“太冲”穴,能够一定程度改善乳腺增生大鼠乳腺组织的病理学形态,对乳腺增生具有一定的治疗效果。2.针刺“膻中”、“足三里”、“太冲”穴,能够影响乳腺增生大鼠乳腺组织Fas/FasL凋亡信号转导通路相关因子Fas、FasL、Caspase-8和Caspase-3的表达情况,其异常改变与乳腺增生的发生发展密切相关。3.针刺“膻中”、“足三里”、“太冲”穴,能够通过良性调节Fas/FasL凋亡信号转导通路相关因子来实现对乳腺增生病的治疗作用。
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