【摘 要】
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本文通过根癌农杆菌介导的水稻转化法,创建了一个约由7000个独立转化系构成的标签群体。并利用热不对称交错PCR(TAIL-PCR),对200个含T-DNA插入的转基因水稻株系进行分析,获
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本文通过根癌农杆菌介导的水稻转化法,创建了一个约由7000个独立转化系构成的标签群体。并利用热不对称交错PCR(TAIL-PCR),对200个含T-DNA插入的转基因水稻株系进行分析,获得了159个T-DNA右边界侧翼序列,结合先前定位的169个T-DNA标签,对T-DNA在水稻基因组中的整合特点进行了分析。
本文通过筛选T-DNA插入群体,共获得10个水稻假病斑突变体,遗传分析揭示了所有的突变体皆由单个隐性的核基因控制。椎虫蓝染色表明,这些突变体叶片上形成的假病斑为真正的细胞死亡所致。
本文通过分析T-DNA标签系插入位点的侧翼序列,筛选到一个在水稻ABC-运载蛋白基因中含有T-DNA插入的转化系,该蛋白与哺乳动物ABC-运载蛋白家族第七亚家族(ABCG)以及拟南芥ABC-运载蛋白家族WBC(White-BrownComplex)亚家族的某些成员显示了很高的同源性,Southern印迹表明,OsWBC1在日本晴基因组中虽然为单拷贝,并且该转化系含有单拷贝的T-DNA插入。通过RT-PCR反应分离到该基因的cDNA。
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