肺炎链球菌可引发多种侵袭性疾病,2岁以下的婴幼儿和老年人是主要的易感人群,疫苗接种可以有效预防肺炎链球菌的感染。目前肺炎疫苗主要有两种,多糖疫苗和多糖蛋白结合疫苗,其中多糖疫苗是T细胞非依赖型抗原,不能对婴幼儿产生有效的免疫保护。将多糖结合到蛋白载体上则多糖抗原即可转变成T细胞依赖型抗原,能在婴幼儿体内产生良好的免疫原性和长久的保护力。本文对肺炎链球菌血清型7F(Pn7F)结合疫苗的研制过程,主要包括活化、结合、结合物纯化、质量控制,以及在小鼠体内的免疫原性进行了研究,得到了以下结论:(1)本文采用还原胺法将多糖和蛋白进行偶联,首先研究了活化反应条件(高碘酸钠的反应浓度、反应时间、反应温度)对多糖活化性质(分子量、活化度和多糖回收率)的影响。研究表明高碘酸钠的浓度与生成的醛基量成正比,活化时间确定为5h,反应温度为4-25℃,pH确定为4.5,超滤膜包孔径定为100KD。(2)本文选择了两种载体白喉毒素无毒突变体CRM197和肺炎链球菌表面蛋白A(PspA),分别在有机相和水相与Pn7F荚膜多糖进行连接,制备出不同性质的结合物,并比较不同的载体和结合物的不同性质对小鼠免疫原性的差别。结果表明,以CRM197为载体的结合物在小鼠上的免疫原性明显高于以PspA为载体的结合物,差异显著。以CRM197为载体的结合物中,水相结合物的免疫原性高于有机相结合物,且活化度为1 1时结合物的免疫原性最高。(3)本文对以CRM197为载体的有机相和水相的结合物的抗原表位用间接竞争抑制Elisa作了进一步的检测,结果证实,Pn7F和CRM197在有机相的结合物产生了优势表位,而Pn7F和CRM197在水相的中结合物没有产生。(4)本文建立了一种Pn7F和CRM197结合物中游离多糖含量的检测方法。筛选出了脱氧胆酸钠对结合物的酸沉条件,当pH在2.5-4.0之间且蛋白浓度为100-300 mg/L时,脱氧胆酸钠对结合物的沉淀效果最好,能专一沉淀结合物,而对游离多糖无沉淀作用。该方法的准确度和重复性均可达到检测要求,且多糖浓度的分析方法专属性好,可用于Pn7F-CRM197结合物中游离多糖含量的检测。