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肌肉是动物生存和运动的重要组织,是人类重要的动物蛋白来源。在机体三种肌肉组织中,骨骼肌是在脊椎动物胚胎期由轴旁中胚层发育而来的一个复杂的组织,与骨骼链接、骨骼的活动和姿势的保持等组织器官的多种功能相关。骨骼肌的形成是一个复杂的过程,在多基因的共同作用下,通过成肌细胞(肌肉前体细胞)的增殖和分化形成肌纤维。基于本实验室前期的GWAS结果,本论文研究了与肉鸡肌肉发育相关的GJA1(缝隙连接蛋白1)和HDAC2(组蛋白脱乙酰酶2)基因的功能和多态性。试验-1:本研究旨在研究功能基因HDAC2、GJA1与鸡肌肉生长发育的关系。利用q RT-PCR技术,检测了HDAC2基因m RNA在成肌细胞增殖分化期、胚胎期(4个时间点)和生长发育不同阶段(5个时间点)的表达特性。HDAC2基因在4个胚龄(ED 14,16,18和21)的胸肌和腿肌组织中表达呈显著上升趋势,该基因可能在胸肌和腿肌的成肌细胞增殖过程中发挥作用。体外细胞培养试验发现,鸡胚成肌细胞增殖的24h至48h期间,HDAC2表达量显著下降,肌肉发育特异性调控因子PAX7的表达量显著升高。在0-72h内,细胞数呈持续上升趋势。随着成肌细胞诱导分化时间的延长,HDAC2和成肌分化标志性基因MYOD1的表达量均显著上升。通过si RNA对GJA1基因进行功能分析。三种类型的si RNA(si RNA-1、si RNA-2和si RNA-3)转染成肌细胞24h后,GJA1表达量显著下降,且si RNA-1对GJA1基因的抑制作用更为显著;与对照组相比,si RNA-1在转染后24h、48h和72h,均显著抑制成肌细胞的增殖和分化。综上所述,HDAC2在成肌细胞发育过程中可能发挥抑制细胞增殖、促进细胞分化的功能。推测GJA1可以促进成肌细胞增殖和分化。试验-2:本研究以269只北京油鸡(BJY)和176只科宝鸡(CB)为素材,通过DNA测序和HRM(高分辨率熔解)的方法,对中外鸡群GJA1和HDAC2基因进行了单核苷酸多态性(SNPs)筛选鉴定。在GJA1基因检测到4个SNP,一个SNP位于外显子区域(C61223231T或C-1110C>T)为同义突变;两个SNP位于内含子区域(A61229799C或c.5460A>C,T61229928A或c.5589T>A);一个SNP位于启动子(A61230599C或c.6260A>C)的区域。在HDAC2基因发现两个SNP均位于启动子区域(T64230025C、A64229858C。GJA1基因的4个SNP均与鸡生长性状显著相关,但是HDAC2基因的两个SNP与生长性状相关不显著。连锁不平衡分析发现,GJA1基因(C61223231T和A61229799C)突变,出现了四种新单倍型(CA,TC,CC,TA)。对GJA1基因单倍型组合和生长性状进行关联分析发现,CC+CC组合表现出组合优势,达到显著水平。HDAC2基因未发现显著水平的代表性组合。本研究表明,GJA1基因可能是影响鸡生长性状的主效基因之一。未来对该基因多态性进行扩大群体验证及对其功能的深入研究,将能够更好地了解其在鸡肌肉发育中的调控作用。