白蛋白紫杉醇、五氟尿嘧啶、洛铂通过自噬信号通路介导胃癌细胞株AGS在抗肿瘤作用中的研究

来源 :贵州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jk224wang1
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目的:胃癌是全球常见的恶性肿瘤之一。我国胃癌负担尤为严重,且大多处于进展期。目前进展期胃癌主要采取手术、化疗、免疫治疗等综合治疗,然而5年生存率仍较低,因此,亟需探索新的胃癌治疗方案。白蛋白紫杉醇是一种以白蛋白为载体的新型微管抑制剂,研究表明具有良好的抗肿瘤作用,由此,本研究旨在探讨:1.白蛋白紫杉醇(Albumin Paclitaxel,Nab-PTX)对比经典胃癌化疗药-五氟尿嘧啶(Pentafluorouracil,5-Fu)、新型三代铂剂-洛铂(Lobaplatin,LBP)等单药以及白蛋白紫杉醇与五氟尿嘧啶(Albumin paclitaxel Combined with pentafluorouracil,Nab-PTX+5-Fu)的联合用药对胃癌细胞株AGS增殖、凋亡、周期的影响,明确Nab-PTX是否具有卓越的抗肿瘤作用,并进一步探索Nab-PTX用于胃癌治疗的方案(单药或联合用药);2.Nab-PTX、5-Fu、LBP、Nab-PTX+5-Fu影响胃癌细胞株AGS凋亡蛋白和自噬信号通路的表达差异,进而探讨Nab-PTX能否通过自噬信号通路抑制胃癌细胞株AGS增殖、促进胃癌细胞株AGS凋亡,并从自噬信号通路的角度分析不同化疗方案诱导胃癌细胞株AGS增殖与凋亡的差异,为胃癌的治疗提供一些新的思考方向和实验数据。方法:1.实验分组:对照组(Control,Ctrl,无药物添加的培养基RMPI 1640)、白蛋白紫杉醇组(Nab-PTX,浓度分别为0.1,0.2,0.4μmol/L)、五氟尿嘧啶组(5-Fu,浓度分别为1,2,4μmol/L)、洛铂(LBP,浓度分别为5,10,20μmol/L)、白蛋白紫杉醇联合五氟尿嘧啶组(Nab-PTX+5-Fu,浓度分别为0.1+1,0.2+2,0.4+4μmol/L);2.细胞增殖实验:采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)进行各组24 h、48 h、72 h细胞增殖检测;3.细胞凋亡及周期测定:采用流式细胞术检测各组24 h时细胞凋亡和周期情况;4.凋亡蛋白及自噬信号通路测定:用蛋白印迹法(Western-blot,WB)检测各组细胞24 h时凋亡蛋白Bax、Bcl-2及自噬信号通路p-AMPK、p-m TOR、p-ULK1、Beclin1、ATG5、ATG12、SQSTM1/p62、LC3II/LC3I等蛋白表达水平。结果:1.细胞增殖实验结果:在24 h、48 h、72 h,与Ctrl相比,Nab-PTX组、5-Fu组、LBP组及Nab-PTX+5-Fu组细胞增殖能力均受到抑制(P<0.05),且各组细胞存活率与药物作用浓度以及药物作用时间呈负相关;2.各组细胞凋亡的差异:与Ctrl相比,各组细胞凋亡率均不同程度增加,且Nab-PTX+5-Fu组>Nab-PTX组>5-Fu组>LBP组(P<0.05);3.各组细胞周期阻滞的差异:Ctrl组主要处于G1/G0期,Nab-PTX组主要处于G2/M期,5-Fu组及LBP组主要处于S期(P<0.05,P<0.01),Nab-PTX+5-Fu组主要处于S期(P<0.05),且其S期比例较5-Fu组增加,G2/M期较Nab-PTX组明显减少;4.凋亡蛋白表达差异:与Ctrl相比,Nab-PTX组(P<0.001)、5-Fu组(P<0.05)、LBP组(P<0.05)、Nab-PTX+5-Fu组Bax增加,Nab-PTX组(P<0.001)和LBP组Bcl-2下降,5-Fu组(P<0.01)和Nab-PTX+5-Fu组Bcl-2增加(P<0.01);5.自噬信号通路蛋白表达差异:对比Ctrl组,Nab-PTX组、5-Fu组及Nab-PTX+5-Fu组(P<0.05)p-AMPK表达增加,Nab-PTX组、5-Fu组(P<0.01)及Nab-PTX+5-Fu组(P<0.05)p-ULK1表达增加,LBP组p-AMPK增加,p-ULK1组明显下降。LBP组Beclin1表达稍增加,Nab-PTX组、5-Fu组及Nab-PTX+5-Fu组(P<0.05)Beclin1均下降。Nab-PTX组、5-Fu组(P<0.05)及Nab-PTX+5-Fu组(P<0.01)的ATG12表达减少,LBP组ATG12表达明显增加(P<0.05)。Nab-PTX组及Nab-PTX+5-Fu组诱导LC3II/LC3I表达增加(P<0.05,P<0.01),SQSTM1/p62表达下降;5-Fu组LC3II/LC3 I表达稍增加,SQSTM1/p62表达增加;LBP组LC3II/LC3I表达减少,SQSTM1/p62表达明显增加(P<0.01)。结论:1.Nab-PTX、5-Fu、LBP均可抑制胃癌细胞AGS增殖、促进细胞凋亡、阻滞细胞周期、诱导自噬信号通路变化,且Nab-PTX抗肿瘤效果优于5-Fu和LBP。2.Nab-PTX+5-Fu抗肿瘤效果优于Nab-PTX、5-Fu单药,这可能与其激活自噬信号通路,诱导自噬增强从而促进细胞凋亡增加有关。
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