基于SNPs标记的猪肉DNA溯源研究

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为了探索建立猪肉食品安全追溯的标识系统,本文以第三代遗传标记单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms, SNP)技术构建猪DNA指纹图谱,根据个体DNA指纹图谱的差异可进行个体识别。一旦出现猪肉安全事故,可快速完成个体标识并追溯到源产地。本文旨在寻找到有效的SNP位点,建立个体DNA指纹图谱——SNP标记板。SNP候选位点可从已知数据库中挑选,也可以挖掘未知的新SNP。采用PCR-RFLP方法对候选SNP进行分型,通过计算各个标记位点的等位基因频率和杂合度,对候选SNP位点的多态性进行评估和分析,筛选出多态性信息含量丰富的位点作为个体标识的有效标记;采用测序法挖掘新的SNP,并检验其有效性;最后将有效的SNP位点形成一个SNP标记板,通过建立模拟的溯源个体识别系统,检验SNP板对猪个体识别的效率。本文主要研究结果如下:1.本实验从大量文献中筛选出23个SNP作为候选标记位点。经检测发现其中11个SNP等位基因在多数猪种中分布较为平衡,杂合度较高,多态性信息含量丰富,是溯源识别的有效标记;2.挖掘未知的SNP位点,通过NCBI数据库查询系统获得大量猪染色体保守区DNA序列,使用软件Primer 5.0设计引物并摸索扩增条件,经预实验检测各引物效率,选择扩增效率较高的引物进行正式扩增,对扩增产物进行测序,将不同品种的该片段的序列进行比对,查找新的SNP位点。本实验挖掘出4个可用于PCR-RFLP分析的SNP位点,经分型和评估,最终发现3个新SNP是有效标记。3.SNP标记板共由13个有效SNP位点所构建,通过对上海屠宰场随机抽取的310头猪(品种未知)样品进行标识,建立模拟的猪肉溯源识别系统;识别结果为可完全识别。
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