红景天苷对鸡胚肺血管内皮细胞、肺血管平滑肌细胞及心肌细胞中HIF-1α表达的影响

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肉鸡腹水综合征(Ascites Syndrome, AS),被称为是威胁肉鸡养殖业的主要三大营养代谢疾病之一,21世纪初,全球每年因肉鸡腹水综合征所造成的经济损失大约在10亿美元左右,其中因该病死亡而造成的直接经济损失已达到大约5亿美元。巨额的经济损失加大了各地学者们对肉鸡腹水综合征的研究力度,目前,对于肉鸡腹水综合征的研究主要还是停留在饲养管理的阶段,临床上存在一些诸如氯化钙、利尿剂(如双氢克尿噻)、健脾利水的中草药(如木通、商陆根、苍术、猪苓、谷子、灯心草)、维生素C等主要功效为利尿、抗高压的药物,但治疗效果并不理想。研究表明,肉鸡腹水综合征发病原因是机体系统性缺氧,而机体长时间代偿性缺氧构成了肺动脉重构,肺动脉重构又加剧了肺动脉高压(Pulmonary Hypertension,PH)的形成,如此循环最终导致了AS,因此,该病又被学者们称为肺动脉高压综合征(Pulmonary Hypertension Syndrome, PHS)。缺氧诱导因子-1(HIF-1)是机体通过感受缺氧信号,从而传导机体中缺氧信号的一个关键的转录因子。缺氧诱导因子-1,是由HIF-1α与HIF-1β两个亚基组成,在机体中,它作为上游控制缺氧的调节蛋白,研究表明,哺乳动物体内的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达水平会随着细胞氧浓度下降而升高,导致其下游的调控蛋白大量表达(如内皮素1、促红细胞生成素、内皮生长因子等),从而产生一系列的生理病理变化。研究表明,红景天苷(salidroside, sal)作为传统中药红景天的有效成分之一,具有抗缺氧、抗疲劳、抗辐射、抗衰老等多种药理作用。通过哺乳动物实验及临床观察证实,它的抗缺氧作用十分明显,也同时具有保护哺乳动物心肺血管的作用。基于大量哺乳动物的研究基础上,我们通过建立诱导鸡胚肺血管内皮细胞(Pulmonary vascular Endothelial Cells, PVECs)、肺血管平滑肌细胞(Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells, PASMCs)及心肌细胞(Cardiocytes)缺氧的模型,以HIF-1α基因表达水平作为衡量机体缺氧的标准,观察红景天苷对HIF-1α基因在鸡胚PVECs、PASMCs及Cardiocytes中的表达水平,探索红景天苷对缺氧诱导的肉鸡鸡胚中的心血管细胞是否具有良好的保护作用,为红景天苷用于防治肉鸡腹水综合征的治疗奠定良好的理论基础。将原代培养的鸡胚PVECs、PASMCs及Cardiocytes各自分为五组:正常对照组、缺氧+不同剂量红景天苷(sal)处理组(40,80,120μg/ml)、缺氧组(0μg/ml),通过荧光定量PCR检测HIF-1α mRNA的表达量。应用试剂盒对鸡胚肺血管内皮细胞、肺血管平滑肌细胞的培养液进行MDA含量的测定。结果表明,与对照组比较,缺氧可显著提高鸡胚肺血管内皮细胞、肺血管平滑肌细胞及心肌细胞内HIF-1α mRNA的表达量(p<0.05),且缺氧的鸡胚肺血管内皮细胞、肺血管平滑肌细胞的培养液中的MDA的含量均上调(p<0.05);与缺氧组比较,红景天苷能够使鸡胚肺血管内皮细胞、肺血管平滑肌细胞及心肌细胞内HIF-1ααmRNA的表达量明显下降(p<0.05),且不同浓度的红景天苷能够使鸡胚肺血管内皮细胞、肺血管平滑肌细胞培养液中的MDA含量下调(p<0.05)。结论:第一,红景天苷能抑制鸡胚肺血管内皮细胞、肺血管平滑肌细胞及心肌细胞中缺氧诱导因子HIF-1α mRNA的表达水平;第二,红景天苷能降低鸡胚肺血管内皮细胞、肺血管平滑肌细胞缺氧组的培养液中的丙二醛(Malondialdehyde, MDA)的含量;第三,通过红景天苷降低缺氧诱导因子HIF-1α mRNA的表达量,进而说明红景天苷具有良好的抗缺氧的作用,从而对处在缺氧状态下的鸡胚肺血管内皮细胞、肺血管平滑肌细胞及心肌细胞具有保护作用。
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