氨基酸是蛋白质的基本单元，是人体完成生理功能的必需物质。发展操作简便、普适性广、重复性优良的HPLC分析方法，一直是分析化学领域探索的重要课题。　　 实验采用邻硝基苯磺酰氯作为标记试剂，RP-HPLC为分析模式，建立了一种新的氨基酸分析方法。通过液质联用对产物进行定性，推测衍生试剂与一、二级氨基酸的反应机理。实验考察了衍生温度、衍生时间、缓冲液pH值以及氨基酸和衍生剂的摩尔比这四个因素对衍生反应的影响。最终确定了衍生反应条件：以pH9.0的硼砂－硼酸缓冲液为氨基酸缓冲液，氨基酸与衍生试剂的摩尔比为1:6，25℃水浴中反应10min。　　 实验以RP-HPLC为分析模式，选择乙腈－NH4AC缓冲液体系作为液相分离氨基酸衍生物的流动相。考察了NH4AC缓冲液浓度、pH值、柱温、流速、洗脱条件等因素对氨基酸分离分析结果的影响。建立了20种氨基酸的HPLC分离方法：Kromasil C18色谱柱(5μm，4.6×250mm)；流动相A：30mmol·L-1的NH4AC溶液；流动相B：乙腈；洗脱梯度：B％：11％→11％(0－10min)，11％→16％(10-11min)，16％→17％(11-16min)，17％→18％(16－19min)，18％→34％(19-35min)，34％→50％(35-38min)，50％→50％(38-45min)；流速：1.0ml·min-1；检测波长：UV275nm；进样量：20μL；温度：室温。20种氨基酸在0.039～2.5mmol·L-1浓度范围内，氨基酸峰面积与浓度呈良好的线性关系，相关系数为0.9982～0.9999。各氨基酸的检出限在0.41nmol(Gly)～2.44nmol(Ser)之间。同时，该衍生方法和分析系统重现性良好，即使在室温下保存，衍生产物都具有良好的稳定性。　　 基于发展的新方法，对几种实际体系中的氨基酸含量进行了测定。包括玉米浆中游离氨基酸的测定，γ－D－谷氨酰－L－色氨酸合成体系的分析方法的建立，绿豆蛋白酶解液中氨基酸含量的测定，实验还对进口蛋白胨和国产蛋白胨中氨基酸的含量进行了比较，结果令人满意。　　 实验结果表明，邻硝基苯磺酰氯柱前衍生氨基酸分析方法具有衍生反应温和、快速，操作简便的优点，而且HPLC分析条件简单、对仪器要求较低、重现性好。此方法能用于食品、反应液等体系中氨基酸含量的测定，是一种操作简便、普适性广、重复性优良的HPLC分析方法。