【摘 要】
：
涡虫是扁形动物门的代表动物,在生物的进化历程中占据着重要的地位,是研究生物发育、进化、再生与免疫的重要模式动物。14-3-3蛋白是一类高度保守的酸性蛋白,广泛存在于所有的真核生物中,并且作为一种信号分子参与许多重要的生命活动进程。本文克隆了东亚三角涡虫（Dugesia japonica）14-3-3α和14-3-3ζ基因,并进行了再生与免疫的相关功能的研究。本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆
论文部分内容阅读
涡虫是扁形动物门的代表动物,在生物的进化历程中占据着重要的地位,是研究生物发育、进化、再生与免疫的重要模式动物。14-3-3蛋白是一类高度保守的酸性蛋白,广泛存在于所有的真核生物中,并且作为一种信号分子参与许多重要的生命活动进程。本文克隆了东亚三角涡虫（Dugesia japonica）14-3-3α和14-3-3ζ基因,并进行了再生与免疫的相关功能的研究。本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆了Dj14-3-3α和Dj14-3-3ζ基因序列。结果表明,Dj14-3-3α基因全长1305 bp,Gen Bank数据库序号为KY070276,5’-非翻译区398 bp,3’-非翻译区124 bp,最大开放阅读框编码260个氨基酸,分子量约为29.69 k Da;Dj14-3-3ζ基因由949 bp组成,Gen Bank数据库序号为KY078796,5’-非翻译区78 bp,3’-非翻译区286 bp,编码254个氨基酸,分子量约为29.68 k Da。蛋白序列特征分析结果显示,Dj14-3-3α蛋白含有两个14-3-3蛋白家族的特征序列。利用MAGE 6.0构建进化树分析发现,东亚三角涡虫的14-3-3α和14-3-3ζ分别位于各家族进化树的基部,符合进化的顺序,可能是14-3-3α和14-3-3ζ的原始类型。利用整体原位杂交技术分析Dj14-3-3α和Dj14-3-3ζ基因的表达谱,结果显示,在成体或再生过程中,Dj14-3-3α和ζ基因的表达位置一致,均表达于涡虫的咽部;切片结果显示,Dj14-3-3α和ζ基因主要表达于涡虫咽的内、外表皮上。由于咽是涡虫的免疫器官,由此推断,东亚三角涡虫Dj14-3-3α和ζ基因可能参与涡虫免疫功能的行使。为了进一步探讨Dj14-3-3α和ζ基因在涡虫中的功能,利用RNAi技术干扰涡虫的Dj14-3-3α和ζ基因。实时定量PCR结果显示,干扰Dj14-3-3α的涡虫中Dj14-3-3ζ基因表达量明显上升;干扰Dj14-3-3ζ的涡虫中Dj14-3-3α基因表达量明显上升。由此推断,Dj14-3-3α和ζ基因在功能上可能存在着互补关系。分别用LPS、PGN、β-Glu和Poly（I:C）诱导涡虫,实时定量PCR结果显示,Dj14-3-3α和ζ基因的表达量均有明显升高。由此推断,Dj14-3-3α和ζ基因参与涡虫的早期免疫。再生过程中的实时定量PCR结果显示,Dj14-3-3α和ζ基因的表达量并无明显变化规律,推测其可能不参与涡虫咽的再生。分别构建了p ET32a-Dj14-3-3α、p GEx-Dj14-3-3α、p ET32a-Dj14-3-3ζ和p GEx-Dj14-3-3ζ原核表达载体,并表达、纯化了6his-Dj14-3-3α融合蛋白。Western blot结果表明,融合蛋白大小与目的蛋白预期大小一致;另外免疫家兔,制备了抗兔-6his-Dj14-3-3α抗体。Dj14-3-3α和ζ融合蛋白的成功表达,为在蛋白水平上更加深入的研究Dj14-3-3α和ζ的性质及其在涡虫再生和免疫过程中的功能做了铺垫。
其他文献
近年来,日益增长的市场需求促进了无线电能传输技术的研究和应用。然而,经过近十年的研究,传统方法如线圈优化设计、控制算法等措施对效率的提升已越来越接近技术的极限,因为它们难以克服效率随传输距离增加而指数下降的固有属性。利用超材料操控电磁场的方法为提高无线电能传输系统的效率提供了新思路。本文探讨了变换光学方法和超材料在近场磁耦合式无线电能传输中应用的可行性,并给出了初步的实验验证结果。首先,分析了基于
新戊丙酯菌素是阿维链霉菌等放线菌产生的一种倍半萜类化合物,其倍半萜碳骨架的氧化后修饰仍存在一些问题未研究清楚。文献报道的体内基因缺失实验证实了非血红素铁/α-酮戊二酸（NHFe/α-KG）依赖的双加氧酶编码基因ptl D负责新戊丙酯菌素生物合成的最后一步氧化修饰,与内酯环的形成直接相关。但是,体外生物化学实验结果显示Ptl D仅能催化新戊丙酯菌素D发生去饱和反应生成新戊丙酯菌素E,反应体系中并未检
彩釉玻璃是目前建筑行业广泛应用的一种装饰材料,但生产彩釉玻璃所用油墨大部分为含铅玻璃油墨,对人们的健康和生态环境会产生严重危害。为解决该问题,本论文以SiO2-B2O3-ZnO系玻璃作为彩釉玻璃油墨基料,研究CeO2、Bi2O3和Cr2O3含量对SiO2-B2O3-ZnO玻璃基料物相组成、化学稳定性、特征温度、膨胀系数、力学性能以及基料与钠钙玻璃润湿性的影响,并探讨了相关机理。将优化后的玻璃基料、
寄主植物不仅为昆虫提供了生长发育不可或缺的营养物质,而且为昆虫提供了重要的栖息地和庇护场所,这对于保证植食性昆虫的种群繁衍至关重要,因而确定植食性昆虫的寄主种类和危害部位是开展昆虫生物学研究的重要内容。另外,植食性昆虫在长期的环境适应过程中,其生理活动与行为表现呈现出周期性时间节律特征,对于昆虫种间特异性的昼夜节律行为的深入了解有助于掌握昆虫的种群动态规律。樟叶蜂Mesoneura rufonot
贵金属纳米材料已经在我们的日常生活中应用的越来越广泛,制备贵金属纳米材料其中一个重要的原材料就是贵金属纳米粒子,由于贵金属纳米粒子具有很好的等离子体共振特性,生物相容性,无毒和稳定性,及其丰富的几何构型,所以贵金属纳米材料广泛应用于光学,医疗诊治,以及提高催化性能方面。通过贵金属纳米粒子与聚合物之间相互作用来制备具有一定功能性的高分子材料是一个非常有意义的新型的研究方向。本课题通过借助银纳米簇（A
如今生活中充斥着大量的视频记录,如何从视频中获取和分析信息是一大重要课题,作为视频内容理解的一个基础课题,视频人体动作识别一直是学者们研究的热点,它拥有着巨大的应用前景。而随着近年来深度学习的不断成熟,使用神经网络来研究动作识别开始成为了主流。本文主要研究的内容是使用深度学习来识别视频人体动作,并先后提出了两个算法,基于训练图CNN特征的视频人体动作识别算法以及基于注意力模型的视频人体动作识别算法
随着半导体制造产业、生物检测以及光学工程等领域的发展,对微纳定位平台的需求日益增加,而目前大行程的纳米定位平台逐渐成为了研究的热点,对于提升应用领域的性能具有重要的影响。传统的大行程精密定位主要采用旋转电机和精密导轨配合实现,但会存在摩擦力等非线性因素影响。因此本文基于音圈电机和柔性铰链设计了一款大行程单自由度纳米级定位平台,具有结构简单、定位精度高、无摩擦等优点,适用于各种需要精密定位运动的装置
构建自然保护地体系已成为我国生态文明建设的重大战略任务,江西已开展有关工作,亟需相关的科学研究。本研究共统计了9个类型的自然保护地相关信息,合计774处,包括建设年代、行政区域、级别、边界范围或地理坐标等内容,采用了分类统计、空间分析的方法,从数量、规模、历程以及在不同地理单元尺度的空间分布格局等多视角出发,分析自然保护地的空间分布规律。在此基础上,以空间聚集最突出的赣北湖泊平原生态区为突破口,提