黄芪三萜类物质对心肌细胞的保护作用及细胞凋亡调控基因表达的影响

来源 :内蒙古医学院 内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yhz8668
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目的 筛选针对病毒性心肌炎(VMC)细胞模型有效的天然药物成分黄芪三萜类物质(Total Extract of Astragalus,TEA),观察研究其在VMC外细胞培养模型中的心肌细胞保护作用的机制,以及对细胞凋亡调控基因的影响。 方法 建立病毒性心肌炎细胞模型,观察TEA对柯萨奇病毒B组3型(CVB3)病毒感染后的Veto细胞是否有保护作用;采用差速贴壁法培养原代乳鼠心肌细胞,镜下观察心肌细胞搏动次数,使用HE染色和a-actin免疫组化法鉴定培养心肌细胞的纯度。以CVB3病毒感染心肌细胞后,进行细胞病变(CPE)抑制试验:CVB3病毒感染乳鼠原代心肌细胞后,于不同时间加入TEA和病毒,逐日观察心肌细胞搏动次数、细胞病变,MTT染色以比较各组间活细胞数的差别;病毒繁殖抑制实验比较不同分组间TCID50的差别以验证TEA的抗病毒活性。实验以盐酸胍作为阳性对照药。应用流式细胞计量术、DNA Ladder分析凋亡发生的情况,RT-PCR测定C-myc表达变化。 结果 TEA在体外实验中(CPE抑制实验)能有效抑制CVB3引起的在Vero细胞及心肌细胞病变(P<0.01)。病毒繁殖抑制实验的结果为:加药组比病毒对照组TCID50降低两个以上对数值,其药效优于同等浓度的抗病毒阳性对照药物——盐酸胍。流式细胞仪和姬姆萨染色能够观察到CVB3感染心肌细胞后存在凋亡,并显示加药组凋亡细胞比率要小于病毒对照组,但没有观察到明显的DNA Ladder。RT-PCR结果提示TEA能下调凋亡早期基因c-myc的表达。 结论 CVB3病毒感染心肌细胞以后,心肌细胞存在凋亡。通过建立针对病毒性心肌炎细胞水平的筛选模型,证实TEA具有心肌细胞保护作用。其机理涉及:下调凋亡早期调控基因c-myc的表达。
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