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脑梗死由于其发病率和死亡率均相当高，所以在脑血管病的研究中居重要地位。其主要病理基础是血管壁的完整性遭到破坏，血管壁由血管内皮细胞和为血管提供支持的基底膜构成，血管内皮细胞和血管基底膜的破坏均可引起脑梗死的发生。现已有报道基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）及基质金属蛋白酶抑制剂（tissue inhibitor of metalloproteinase TIMP）在脑梗死的的病理生理过程中发挥重要作用。其中，MMP-2在基底膜细胞外基质（extracellular matrix，ECM）的降解中起重要作用。TIMP-2为MMP-2的内源性抑制剂，能否通过抑制MMP-2的表达或增加TIMP-2的表达减少基底膜ECM的降解，以减轻缺血性脑损伤，目前尚未见报导。本研究以大鼠局灶性脑梗死为基础采用免疫组化技术，观察MMP-2、TIMP-2在大鼠局灶性脑梗死中的表达及基质金属蛋白酶抑制剂开博通对MMP-2、TIMP-2的影响。 SD大鼠40只，随机分为8组，分别为假手术组、缺血6小时、12小时、1天、3天、5天、7天及缺血+开博通组。采用线扎颈总动脉加缺氧诱导的方法，建立SD大鼠局灶性脑梗死模型，方法如下：将大鼠分别称重，用10%水合氯醛（0.3ml/100g）腹腔注射麻醉，置于手术台上，四肢用胶带固定，常规颈部消毒，行颈部正中切口，充分暴露左侧颈动脉三角，在手术显微镜下充分分离颈总动脉，在远端结扎，确认血流阻断后缝合颈部皮肤，在手术同时行尾动脉插管以监测血PH、PO2、PCO2以保持在生理范围内，用电<WP=31>热毯保持直肠温度在37.0℃±0.5℃，待鼠出现肢体活动后，置于缺氧瓶内，此瓶接N2和O2混合气，其比例92%±5%N2，8%±1%O2，将瓶内充气约十分钟后关闭气伐，缺氧40分钟后将鼠取出，待其清醒，术前术后在标准条件下饲养，鼠可自由进食水，假手术组步骤同前，除外动脉结扎和缺氧。鼠清醒后参考Zea Longa的评分标准进行神经功能评分，评分标准：0分：无神经功能缺损体征；1分：不能完伸直右侧前爪；2分：向外侧转圈；3分：向右侧倾倒；4分：不能自发行走，意识丧失。评分在一分以上认为梗死模型成功。缺血后5天组于处死前进行神经功能评分。缺血+开博通治疗组待缺血清醒后30分钟给药。剂量以体表面积成人剂量计算，每200g大鼠的系数为0.018。用开博通0.45mg/kg每日分3次灌胃，5天后进行神经功能评分并处死取脑。 将造模成功后的大鼠分别在模型制备后6小时、12小时、1天、3天、5天、7天深麻醉下暴露心脏，用12号穿刺针行左心室插管，剪除右心耳，用0.9%生理盐水灌注至清亮，换用4%多聚甲醛0.1MPBS，每只约200ml灌注、断头取脑，以额至枕行冠状切片，将切片置于4%多聚甲醛0.1MPBS固定4-6小时，换用0.1MPBS过夜，常规脱水、透明、浸蜡、包埋，以备免疫组化检测。 免疫组化检测结果显示在假手术组及正常对照的鼠脑，MMP-2与TIMP-2呈极低水平的表达，主要在血管壁周围。MMP-2于缺血后12小时开始增加，以神经细胞表达为主，至第5天达高峰，第7天开始呈下降趋势。TIMP-2亦随MMP-2的增加而增加，但与MMP-2相比增加幅度较小。缺血+开博通组单纯缺血组相比，<WP=32>MMP-2表达明显降低（P<0.05），且神经功能明显改善。TIMP-2表达无明显改变（P>.05）。表明开博通具有抑制缺血灶MMP-2的表达，减轻缺血后神经功能损害的作用，而与TIMP-2无协同作用。 基质金属蛋白酶是一组含Zn2+的能降解细胞外间质的蛋白酶，通常在中性条件下发挥活性，有Ca2+参与时活性最大。MMPs在基底膜降解中起着主要作用。细胞外间质（extracellular matrix，ECM）是细胞之间的物质，由多种蛋白质和非蛋白质组成，构成细胞生活的微环境，具有支持、连接、营养和防御作用。血管的基底膜主要由ECM构成。MMP-2即明胶酶-A，MMP-2酶原分子量为72KD，活性分子量为66KD，是血管壁细胞表达和分泌的最主要的基质金属蛋白酶，可以高效降解基底膜的主要成分—Ⅳ型胶原，在对内膜的损伤过程中起关键作用。分泌MMP的细胞同时也分泌TIMP，TIMP是MMP的天然特异性抑制剂，在ECM代谢中起着与MMP对应的负性调节作用，TIMP-2是MMP-2的内源性抑制剂，随着MMP-2的表达而表达，很少受细胞因子的诱导，选择性抑制MMP-2，可阻止MMP-2的活化和其作用，影响蛋白分解损伤的程度和持续时间。 开博通通过其自由巯基与血管紧张素转化酶活性中心Zn2+结合而抑制其活性，同样也与MMP活性中心Zn2+结合而抑制其活性。本实验结果显示在大鼠脑缺血12小时MMP-2在皮层、底节、海马区的表达即增加，第五天达高峰，明显高于对照组。在脑缺血的晚期可发生血脑屏障破坏，血清蛋白和水分等血浆成分可从血管腔向血管周围间质，特别是向白质中漏出，而继发血管源性脑水<WP=33>肿，一般从脑缺血后12小时开始出现，4-5天达到高峰。本实验MMP-2表达的时间与脑缺血后血管源性脑水肿发生的时间一致，表明MMP-2在血管源性脑水肿的发生中起重要作用。而TIMP-2虽有轻度增加，但与对照组相比无明显差异，可能在梗塞后MMP-2与TIMP-2间的平衡遭到破坏，内源性TIMP-2不能抑制MMP-2的表达，加重了缺血性脑损伤。 MMP-2在缺血性脑血管病的发病过程中起重要作用，与脑缺血后血管源性脑水肿密切相关，?