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目的：构建CVB3m病毒株基因组全长cDNA基因表达文库，为进一步研究其体外RNA转录产物的感染性，阐明致病机理及探索新型疫苗奠定基础。方法：制备Balb/C新生乳鼠急性病毒性心肌炎模型并进行病理学检查；从感染CVB3m的乳鼠心肌组织中分离病毒，并在Hep2细胞中增毒；提取病毒mRNA、检测其纯度和浓度；在AMV逆转录酶作用下，将病毒mRNA逆转录成第一链cDNA，在RNase H和DNA聚合酶Ⅰ作用下合成第二链cDNA；将双链cDNA平头末端连接上EcoRⅠ连接子，重组进噬菌体λgt11载体的EcoRⅠ酶切位点之间，用噬菌体包装蛋白包装，转染宿主菌Y1090；经IPTG诱导和X-gal颜色选择测定，计算噬菌体包装液的滴度、cDNA文库的库容量及重组百分比；应用CVB3m免疫的鼠多克隆抗血清进行免疫学和地高辛标记核酸探针进行噬斑原位杂交筛选出阳性克隆，进一步用PCR扩增2B基因鉴定筛选出的阳性克隆。结果：急性病毒性心肌炎乳鼠心肌标本病理学检查均有不同程度的炎性细胞浸润、心肌出血、坏死；所构成的CVB3mcDNA文库的库容量为3.18×106重组子，噬菌体包装液滴度为1.59×107pfu/ml，重组百分比为71％；免疫学筛选出4O个可能的阳性克隆；地高辛核酸探针进行噬斑杂交筛选出8个阳性克隆；2B基因被扩增。结论：建成CVB3m基因组全长cDNA文库，筛选出了阳性克隆，扩增出2B基因；通过免疫血清、特异性探针及特异性引物扩增证实已成功地构建了CVB3m基因组全长cDNA分子。本研究结果将为阐明CVB3m毒株2B蛋白的毒力及其致病机理奠定基础。