论文部分内容阅读
目的：将人干扰素α-2b(human interferonα-2b,hIFNα-2b)基因导入胡萝卜愈伤组织细胞，探讨植物细胞表达hIFNα-2b的可行性。 方法：将已构建成功并保存于大肠杆菌DH5α中的人干扰素α-2b基因植物双元表达载体pBI121-hIFNα-2b以冻融法转化根瘤农杆菌LBA4404感受态细胞，经过卡那霉素和利福霉素的双重筛选，选出阳性菌落，并经PCR鉴定质粒成功转化。利用植物离体培养技术培养胡萝卜愈伤组织细胞，并通过根瘤农杆菌介导的遗传转化法，用含有质粒 pBI121-hIFNα-2b的农杆菌感染胡萝卜愈伤组织细胞，经卡那霉素和头孢霉素双重筛选，选出转基因阳性细胞。利用RT-PCR、Western Blotting检测阳性细胞中hIFNα-2b基因的表达产物。 结果：经RT-PCR与Western Blotting检测，转基因阳性细胞中存在hIFNα-2b基因的表达产物。 结论：本研究成功将hIFNα-2b基因导入胡萝卜愈伤组织细胞，并检测到该基因的表达产物，证明胡萝卜愈伤组织细胞能够表达hIFNα-2b基因，为进一步利用转基因植物生产重组干扰素奠定了基础。