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本实验选用S06和S52两个黄瓜品系,以子叶和子叶节两种不同外植体作为转化受体,利用根癌农杆菌LBA4404介导进行遗传转化,同时对预培养时间、共培养时间和抗生素敏感程度三个影响遗传转化的因素进行了研究。
S05、S06子叶诱导的最佳培养基分别为:MS+BA 3.0 mg.L-1+ABA 1.0 mg.L-1+AgNO3 2.0 mg.L-1 和MS+BA 1.5 mg.L-1+ABA 0.5 mg.L-1+AgNO3 2.0 mg.L-1。S06子叶节的芽启动培养基为:MS+BA 1.5 mg.L-1+IAA 0.2 mg.L-1,芽诱导培养基为:MS+BA 0.5 mg.L-1+IAA 0.02 mg.L-1。
实验结果表明:S06和S52子叶转化体系,预培养时间均为1 d,共培养时间均为4-6 d。
在芽诱导培养阶段, S06子叶Kan的最适临界浓度为140 mg.L-1,S52子叶Kan的最适临界浓度为120 mg.L-1;S06子叶节Kan的最适临界浓度也为140 mg.L-1。无论不同的外植体类型还是不同的黄瓜品系,其再生出的芽在伸长和生根阶段,对Kan的最适临界浓度均为100 mg.L-1。由于S52本身是长势较弱的品系,所以在伸长和生根阶段其长势远不如S06,很多表现为簇生和早开花。
以S06子叶为转化受体,pBI121-ATT1为中间载体的转化实验中,409个外植体,经选择培养后,共获得9个抗性芽,在伸长及生根培养后, 9个抗性芽中有5个完全白化,1个不能伸长,最终3个抗性芽伸长并能生根,即获得了3株抗性植株,经PCR检测,结果显示,均扩增出2000bp的目的片段。
以S52子叶为转化受体,pBI121-LUC为中间载体的转化实验中,543个外植体,经选择培养后,共获得82个抗性芽,但是在伸长及生根培养时,大部分很难伸长或生根,最终只获得14株抗性植株,经PCR检测,结果显示,只有1株未扩增出目的片段,其余13株均扩增出630bp的目的片段。
以S06子叶节为转化受体,pBI121-LUC为中间载体的转化实验中,102个外植体,经选择培养后,获得52个抗性芽,在伸长及生根培养时,有15个完全白化,最后获得37个抗性植株,但是经PCR检测后,其均未扩增出目的片段。