食品安全关乎人类生命健康,真菌毒素是危害食品安全的一类重要的小分子污染物,对人类和动物均具有很强的毒害作用。因此,构建准确、灵敏、特异和快速的真菌毒素检测方法对于保障食品安全和人类健康意义重大。上转换荧光纳米材料具有反斯托克斯位移大、荧光寿命长、光化学稳定性好、生物毒性低、抗光漂白和光闪烁以及无自体荧光干扰等优点,在复杂基质的生物检测中具有巨大的应用潜力。本论文采用高温热解法制备了808 nm激发的核壳上转换荧光纳米粒子,以真菌毒素适配体为特异性识别分子,分别结合CRISPR技术、双信号检测和纸基分析技术,构建了三种高灵敏、高特异的真菌毒素生物传感新方法,主要内容包括:1.构建了CRISPR-Cas12a介导的荧光共振能量转移呕吐毒素（DON）检测方法。以上转换纳米粒子和金负载MXene纳米片作为CRISPR-Cas12a末端的能量供体-受体对,DON适配体作为CRISPR-Cas12a的激活序列。适配体与DON的结合抑制了CRISPR-Cas12a对单链DNA修饰的上转换纳米粒子的反式切割能力,导致上转换纳米粒子吸附到纳米片表面,荧光淬灭。聚丙烯酰胺凝胶电泳和SYBR Green I荧光实验证明了DON能够有效抑制适配体对CRISPR-Cas12a反式切割活性的激活。在最优条件下,上转换荧光强度的相对值与DON浓度的对数值呈现良好的线性关系,线性范围为1ng/m L～500 ng/m L,检测限为0.64 ng/m L,应用于玉米粉中DON检测的回收率为96.2%～104.6%。本方法将真菌毒素适配体与CRISPR技术结合,拓宽了CRISPR传感技术对非核酸小分子食品危害物的检测范围。2.为了提高检测的可靠性和适用性,构建了基于适配体构像转换的荧光-表面增强拉曼散射（SERS）双信号赭曲霉毒素A（OTA）检测方法。以适配体互补链修饰的上转换纳米粒子为荧光标记,适配体修饰的金纳米海胆为SERS增强基底,6-羧基四甲基罗丹明（TAMRA）染料作为淬灭剂和SERS信标。上转换纳米粒子与金纳米海胆通过核酸杂交形成纳米复合物,当适配体与OTA特异性结合形成类似“茎-环”结构后,修饰在适配体另一端的TAMRA远离上转换纳米粒子的同时靠近金纳米海胆表面,从而实现上转换荧光恢复和SERS信号增强。在最优检测条件下,荧光和SERS信号的相对值与OTA浓度的对数值呈现良好的线性关系,在0.01 ng/m L～100 ng/m L和0.01 ng/m L～50ng/m L的线性范围内,检测限分别为3.2 pg/m L和8.6 pg/m L,在啤酒中OTA的加标回收率分别为95.2%～103%和92.4%～108%。本方法的两个检测信号可相互校对,从而有利于提高检测准确度和可靠性。3.为了进一步提高检测的效率和便捷性,构建了智能手机协助的同时可视化检测玉米赤霉烯酮（ZEN）和OTA的双色纸基传感器。以适配体修饰的双色上转换纳米粒子和Cu-TCPP纳米片作为荧光供体和受体,位于纸基样品区的ZEN和OTA在纸基毛细管力的作用下迁移到两个检测区与相应适配体特异性结合后导致双色上转换纳米粒子和Cu-TCPP纳米片之间的空间距离增大,双色荧光恢复。然后利用智能手机和颜色识别软件分别采集荧光图像以及分析RGB信号。在最优条件下,绿色荧光图片的ΔG值和蓝色荧光图片的ΔB值分别与ZEN和OTA浓度的对数值具有良好的线性关系,线性范围分别为0.5 ng/m L～100 ng/m L和0.1 ng/m L～50 ng/m L,检测限分别为0.44 ng/m L和0.098 ng/m L,在玉米粉中的加标回收率分别为94.5%～103.7%和92.2%～106.8%。本方法具有试剂和样品消耗量小、灵敏度高、选择性好、交叉反应性低和可现场快速检测等优点,为复杂食品基质中多种真菌毒素的同时快速筛查提供了选择。