BmNPV-pif-1的序列分析及亚细胞定位分析

来源 :江苏科技大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:anewday4all
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
家蚕核型多角体病毒(BmNPV)基因组全长128kb,预测编码136个ORF,BmNPV ORF97和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)ORF119(Ac119)为同源基因,已有研究表明Ac119是一个重要的口服感染因子,命名为pif-1。研究表明AcMNPV缺失了pif-1时,其包涵体来源病毒(ODV)就会失去口服感染性,但却不影响芽生病毒粒子(BV)的感染性。而BmNPV ORF97(pif-1)的功能尚没有研究。  因此,本论文主要从BmNPV pif-15-RACE序列分析、启动子序列分析、抗体制备、pif-1基因的表达时相分析以及蛋白的细胞定位这几方面来开展相关研究,为后期pif-1的深入研究奠定基础。  1)pif-1序列分析:通过5-RACE技术,克隆得到了BmNPV pif-1的5上游序列(100bp左右),在5上游序列可以看到病毒晚期启动子的保守序列(A/T/G)TAAG。进一步对PIF-1编码序列分析发现其含有2个RGD基序。KSHV(加上全名)研究表明 RGD基序可以介导目的蛋白与整联蛋白αVβ3结合,促使病毒粒子与靶细胞的融合。  2)PIF-1抗体制备:运用了原核表达系统成功表达了PIF-1蛋白。通过免疫新西兰大白兔成功的得到了特异比较高的抗体,为后期蛋白互作及蛋白定位研究奠定基础。  3)pif-1的转录时相分析:通过荧光定量PCR技术得到了pif-1的转录时相。在病毒的感染早期,主要是利用宿主的一些细胞元件和原料来合成自身的蛋白,在晚期病毒粒子的组装过程中一些功能性的蛋白开始大量的表达,以利于病毒的组装和传播。  4)pif-1亚细胞定位分析:利用瞬时表达系统,将pif-1与eGFP融合表达,通过激光共聚焦显微镜观察荧光分布位置,结果发现pif-1-eGFP荧光均匀分布于细胞质中,而在病毒感染后,荧光进入细胞核中,表明pif-1在其它病毒因子参与下,被运输至细胞核中,并在其中被装配到核衣壳中,形成成熟的ODV粒子。  通过以上的研究和分析,我们预测 PIF-1蛋白在口服感染的过程中可能介导口服感染复合物与整联蛋白αVβ3互作,使得ODV粒子与中肠上皮细胞相结合,从而完成ODV粒子与上皮细胞的膜融合。
其他文献
学位
本文通过对荣华二采区10
期刊
近年来,随着在全世界范围内人们对能源的需求量与日俱增,传统能源面临枯竭的危机。面对全球性能源危机愈演愈烈,开发与利用空间太阳能得到前所未有的重视,随着空间太阳能卫星
随着科技发展,视频应用不断地得到普及,改变着我们的生活、交流和工作方式。而未经压缩处理的视频数据量往往很大,不便于存储和传输,因此需要进行视频压缩编码来减少冗余信息
在宽禁带半导体领域,ZnO是继SiC和GaN之后又一种极具潜力的光电子材料。这种化合物半导体在室温下禁带宽度为3.37eV,其更高的自由激子结合能可达60MeV,并且发光波长比GaN的蓝
机器视觉测量技术解决了传统测量方法不能满足社会对测量技术的要求这一问题,通过改进图像处理技术更容易提高测量系统的精度与速度,使得机器视觉测量技术逐步占据测量领域的
微波点火技术应用前景广阔,将之应用于汽车发动机点火,取代传统的火花塞点火方式,可以做到节能、减排。一直以来,火花塞点火一直占导汽车发动机点火方式,从单点点火到多点点
随着无线传感器网络的广泛应用,多路径路由的研究也逐渐成为了研究热点。与单路径路由相比,多路径路由不仅能将数据包分开传送,同时,还可以提供更多的备选链路。本篇论文主要是基
学位