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同种异基因造血干细胞移植由于供受者的组织相容性白细胞抗原(histocompatibility Leukocyte antigen, HLA)不同,在移植后极易引发移植物抗宿主病(graft versus host diseases, GVHD)。做为一种免疫反应,它可累及全身多个组织和器官,严重危害患者的生命健康。但如果完全去除这些导致GVHD的移植物中的淋巴细胞,又会大大增加肿瘤复发的风险。因此,如何解决这一棘手问题,是目前移植治疗领域的研究热点。光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)方法目前已经成为一种全新的肿瘤生物治疗方法。PDT的基本原理是:光敏剂与肿瘤组织具有较高的亲和力,当给予一定波长的光照后,可发生一系列光化学反应,产生单态氧以及其他活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产物来杀伤肿瘤细胞【1】。目前PDT主要应用在实体瘤和皮肤疾病的治疗领域,在造血干细胞移植治疗血液系统恶性疾病方面的研究甚少。在移植物中,那些引起GVHD的T淋巴细胞也可以类似肿瘤细胞一样聚集光敏剂,因此,PDT可以有效地清除这部分T淋巴细胞,来提高移植成功率。而移植物中还有一类T淋巴细胞,它们并不起介导GVHD的作用,PDT对它们似乎也没有影响,它们还可能在受者体内起到一定的对抗肿瘤细胞的作用。如果将移植物中这类有益的T淋巴细胞保留下来,就有可能减少肿瘤的复发。本研究使用光敏剂氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid,ALA)对移植物进行处理,旨在探讨ALA-PDT在异基因骨髓移植( allogenic bone marrow transplantation,allo-BMT)中的作用机制,是否在减轻GVHD的同时保留一部分移植物抗白血病效应(Graft versus leukemia,GVL)。主要研究如下:1.确定小鼠淋巴细胞体外培养时rhIL-2、PHA的最佳浓度取小鼠的脾脏,利用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离淋巴细胞。并分别加入rhIL-2、PHA培养5 d,经MTT法检测确定PHA、rhIL-2的最佳浓度分别为:40μg/ml、25 U/ml。2.确定丝裂霉素去增值的最佳浓度在受鼠的淋巴细胞中按照终浓度(μg/ml)10、20、25、30、40、50加入丝裂霉素培养5 d,经MTT法检测确定25μg/ml丝裂霉素为最佳的实验浓度。3.制备单向混合淋巴细胞,确定混合细胞比例将刺激细胞(受鼠淋巴细胞)和反应细胞(供鼠淋巴细胞)按浓度比为2:1、1:1、1:2进行混合培养,用MTT法检测细胞的杀伤效果,确定最佳的混合淋巴细胞比例2:1作为混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte culture,MLC)的浓度。4.ALA-PDT选择性清除同种异基因小鼠激活的淋巴细胞的ALA浓度在单向混合淋巴细胞中分别加入1.5、2.0、2.5 mmol/L ALA,培养4 h,然后给予一定波长光照射后,加入刺激细胞继续培养。应用MTT法计算单向混合淋巴细胞对刺激细胞的杀伤率。在加入1.5 mmol/L ALA时单向混合淋巴细胞对刺激细胞的杀伤率最低。5.ALA-PDT减轻同种异基因小鼠骨髓移植后aGVHD反应将经过ALA-PDT处理过的单向混合淋巴细胞及供鼠的3×10~7/ml骨髓细胞共计0.5 ml,经尾静脉输注到经8.5 Gy 60Co照射的受鼠体内。与对照组相比,受鼠的一般情况、外周血WBC增加情况、GVHD反应程度、细胞植入情况均有所改善。6.ALA-PDT减轻急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)小鼠同种异基因骨髓移植后GVHD反应,并且保留了GVL效应将经过ALA-PDT处理过的单向混合淋巴细胞联合供鼠的骨髓细胞输注给ALL小鼠体内,ALL受鼠的体重增长情况、造血功能恢复情况及无病生存时间等指标明显好于对照组。根据以上的结果,得到如下的结论:(1)ALA-PDT能够选择性清除小鼠同种异体激活的淋巴细胞。(2)将经过ALA-PDT处理的混合淋巴细胞联合供鼠骨髓细胞移植给同种异基因小鼠,可以显著提高受鼠的无病生存率,减轻GVHD。ALA-PDT有望成为一种新型的治疗骨髓移植后GVHD和保留一定GVL作用的肿瘤治疗方法。