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[研究背景]肺癌是我国乃至世界范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。随着空气污染的加重,肺癌的发病率和死亡率呈逐年上升的趋势。肺癌分为小细胞肺癌(small cell lung cancer)及非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer),NSCLC占所有肺癌发病率的80-85%,多数肺癌患者发现时已属晚期,导致肺癌的整体5年生存期仅为16%。二陈汤是中医化痰的经典方剂,而痰证、瘀证是晚期肺癌的基本证候。研究显示,肺癌的进展与肿瘤新生血管的形成密切相关,抑制肿瘤血管的形成也是目前肺癌靶向治疗的常用手段,JNK信号通路的激活可以促进肿瘤新生血管的形成,进而促使肿瘤发生转移。导师前期研究显示:二陈汤含药血清可通过JNK及P38通路抑制A549细胞株增殖以及细胞膜的ICAM-1(intercellular adhesion molecular-1,ICAM-1)表达。这表明,二陈汤可通过抑制肿瘤细胞中ICAM-1的表达和抑制JNK信号途径发挥抗肿瘤作用。也提示化痰法在NSCLC治疗中有其确切的作用。为此,本次实验拟建立荷A549肺癌细胞的裸鼠模型,通过对实验动物灌胃二陈汤及其加减方结合顺铂化疗的体内动物实验,用western blot法检测裸鼠肿瘤组织中的P-JNK、P-p38、VEGF、VEGF1、VEGF2、VCAM蛋白含量来观察二陈汤及其加减方是否能对肿瘤的血管形成产生抑制作用,从而抑制NSCLC的进展。[研究目的]明确二陈汤及其加减方是否可通过抑制JNK信号通路,干预NSCLC肿瘤血管生成,进一步阐明二陈汤及其加减方治疗NSCLC的机制,以及在NSCLC治疗中,中医化痰法的微观作用。[研究方法]本实验拟建立荷A549肺癌细胞的裸鼠动物模型,将成瘤裸鼠60只采用随机数字表法分为6组,分别给予生理盐水、二陈汤、二陈汤加大剂量药物、二陈汤加破血逐瘀药物、益气养阴化痰散结药方及以顺铂组为阳性对照组进行干预,统计14天后各组治疗组与对照组的各项差异,比较各组动物肿瘤质量大小,计算抑瘤率;使用Western blot方法检测二陈汤对裸鼠干预后,测定裸鼠肿瘤中P-JNK、P-p38、VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2、VCAM-1蛋白的表达。实验数据采用SPSS 21.0进行统计分析,以P<0.05,有统计学差异。[研究结果]1.二陈汤大剂量组、二陈汤加破血逐瘀中药组以及顺铂组均能够抑制裸鼠体内肺癌肿块的进展,其抑瘤率分别为:13.95%(P<0.05),16.94%(P<0.05),20.83%(P<0.01)。与对照组相比具有统计学差异。但中药组的荷瘤裸鼠其生存活力较顺铂组更好。2.二陈汤大剂量组,其P-JNK蛋白的表达含量显著降低,与对照组相比具有统计学差异(p<0.05);顺铂组,其P-JNK蛋白的表达含量显著降低,与对照组相比具有统计学差异(p<0.05)。但顺铂组与二陈汤大剂量组相比,差异无统计学意义(p>0.05)。二陈汤常规剂量干预裸鼠,P-JNK蛋白的表达量也会降低,但与对照组相比差异无统计学意义(p>0.05)。3.二陈汤大剂量组,其P-p38蛋白的表达含量显著降低,与对照组相比具有统计学差异(p<0.05);顺铂组,其P-p38蛋白的表达含量显著降低,与对照组相比具有统计学差异(p<0.05)。二陈汤加破血逐瘀组,其P-p38蛋白的表达含量显著降低,与对照组相比具有明显统计学差异(p<0.01);但三组组间比较差异无统计学意义(p>0.05)。4.二陈汤大剂量组,其VEGF蛋白表达量显著降低,与对照组相比具有统计学差异(p<0.05),顺铂组,其VEGF蛋白表达量显著降低,与对照组相比具有统计学差异(p<0.05);益气养阴化痰散结组,其VEGF1蛋白表达量显著降低,与对照组相比具有统计学差异(p<0.05),顺铂组,其VEGF1蛋白表达量显著降低,与对照组相比具有统计学差异(p<0.05),而二陈汤组的裸鼠肿瘤组织中VEGFR-1蛋白表达含量与对照组相比无统计学差异(p>0.05);二陈汤大剂量组VEGFR-2蛋白的表达含量显著降低,与对照组相比具有统计学差异(p<0.05),二陈汤加破血逐瘀中药的裸鼠肿瘤组织中的VEGFR-2蛋白的表达含量显著降低,与对照组相比具有统计学差异(p<0.05),益气养阴化痰散结组裸鼠肿瘤组织中的VEGFR-2蛋白的表达含量显著降低,与对照组相比具有明显统计学差异(p<0.01),顺铂组,VEGFR-2蛋白的表达含量显著降低,与对照组相比具有明显统计学差异(p<0.05),此四组组间比较无统计学差异,(p>0.05)。5.二陈汤组和二陈汤加破血逐瘀中药组对VCAM蛋白的表达有抑制作用,但无统计学差异(p>0.05)。[研究结论]1.二陈汤大剂量、二陈汤加破血逐瘀中药以及顺铂组均能够抑制裸鼠体内肺癌肿块的进展。但中药组的荷瘤裸鼠其生存活力较顺铂组更好。2.二陈汤大剂量及顺铂组裸鼠的P-JNK蛋白的表达含量显著降低,故认为其可以通过阻断JNK信号通路来发挥抑制肺癌的进展。3.二陈汤大剂量、二陈汤加破血逐瘀中药及顺铂组裸鼠的P-p38蛋白的表达含量显著降低,故认为二陈汤还可以通过阻断P38通路来抑制NSCLC的进展,而在二陈汤中加入破血逐瘀中药后,其对P38通路的阻断力量更强。4.二陈汤大剂量、顺铂组裸鼠的VEGF蛋白表达含量显著降低;益气养阴化痰散结组的裸鼠其VEGF1蛋白表达量显著降低,二陈汤组无明显改变;二陈汤大剂量、二陈汤加破血逐瘀药物、益气养阴化痰散结组的VEGFR-2蛋白表达量明显降低,其中益气养阴化痰散结组的裸鼠VEGF2蛋白表达含量降低的更明显,由此可见,二陈汤及其加减方主要通过抑制VEGFR-2蛋白表达来发挥抑制肿瘤血管生成的作用。总结:二陈汤能够通过抑制肿瘤血管形成来发挥抑制肺癌进展,其机制与二陈汤抑制了JNK信号通路及P38通路来抑制VEGFR-2蛋白表达有关。