【摘 要】
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目的:该课题从药代动力学、药效动力学二方面运用放射性示踪技术动态观察脾虚证大鼠对铁吸收和/或转运代谢过程和运用RNA斑点杂交技术研究脾虚证大鼠对转铁蛋白受体mRNA表达的影响,以及补脾法对脾虚证大鼠铁吸收和/或转运代谢过程和对转铁蛋白受体mRNA表达的影响,实验研究脾主运化/脾失健运与铁代谢的关系,探讨脾主运化生物学意义,揭示脾主运化、脾为后天之本等重要中医理论的科学内涵,并为脾的功能和/或脾虚证
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目的:该课题从药代动力学、药效动力学二方面运用放射性示踪技术动态观察脾虚证大鼠对铁吸收和/或转运代谢过程和运用RNA斑点杂交技术研究脾虚证大鼠对转铁蛋白受体mRNA表达的影响,以及补脾法对脾虚证大鼠铁吸收和/或转运代谢过程和对转铁蛋白受体mRNA表达的影响,实验研究脾主运化/脾失健运与铁代谢的关系,探讨脾主运化生物学意义,揭示脾主运化、脾为后天之本等重要中医理论的科学内涵,并为脾的功能和/或脾虚证本质研究提供实验依据.方法:从实验Ⅰ到实验Ⅴ层层深入,实验研究补脾法对脾虚证大鼠<59>Fe代谢和转铁蛋白受体mRNA表达的影响.实验Ⅰ雄性SD大鼠80只随机分为正常组、正常补脾组、脾虚组、脾虚补脾组、缺铁组、缺铁补脾组、脾虚缺铁组、脾虚缺铁补脾组8组,按动物模型规范化的要求造模后,8组一次性灌服<59>FeCl<,3>水悬液0.2ml/220g/只,同时依照人和鼠体重换算,正常补脾组、脾虚补脾组、缺铁补脾组、脾虚缺铁补脾组4组即时灌服1:1四君子汤药液1.5ml<±>,其它4组用1.5ml±生理盐水灌胃,日一次.分别在0.5h、1h、1.5h、3h、6h、12h、24h大鼠尾部取血0.2ml,用γ放射免疫计数器测量其放射性<59>Fe计数,观测放射性铁经大鼠胃肠道进入全身循环系统的药代动力学变化;实验Ⅱ至实验Ⅴ雄性SD大鼠160只随机分为正常组、正常补脾组、脾虚组、脾虚补脾组、缺铁组、缺铁补脾组、脾虚缺铁组、脾虚缺铁补脾组8组,按动物模型规范化的要求造模后,8组一次性灌服<59>FeCl<,3>水悬液0.2ml/220g/只,同时依照人和鼠体重换算,正常补脾组、脾虚补脾组、缺铁补脾组、脾虚缺铁补脾组4组即时灌服1:1四君子汤药液1.5ml<±>,其它4组用1.5ml<±>生理盐水灌胃,日一次.每组分别在第0.5d、1d、2d、4d、8d、14d随机选取3只大鼠,眼球放血法处死,取出脾、肝、小肠、胃、肾器官组织备用.其中,实验Ⅱ用γ放射免疫计数器分别测量大鼠脾、肝、小肠、胃、肾器官组织放射性<59>Fe计数,观测放射性铁由全身循环系统向大鼠组织器官转运、分布的药代动力学变化;实验Ⅲ和实验Ⅳ取出正常组、正常补脾组、脾虚组、脾虚补脾组4组大鼠脾脏,机械研磨法制备单细胞悬液,细胞淘洗法分离细胞,制备脾巨噬细胞单细胞悬液备用.实验Ⅲ用γ放射免疫计数器检测放射性<59>Fe含量,观测放射性铁由全身循环系统向大鼠器官组织细胞转运代谢变化,以监测大鼠细胞内外铁的转运效率或利用效力.实验Ⅳ取出正常组、正常补脾组、脾虚组、脾虚补脾组4组在第2d、4d大鼠脾巨噬细胞单细胞悬液,采用流式细胞术检测脾巨噬细胞转铁蛋白受体阳性表达的细胞数,检测大鼠器官组织细胞转铁蛋白受体表达情况;实验Ⅴ取出正常组、正常补脾组、脾虚组、脾虚补脾组4组在第0.5d、1d、2d、4d、8d、14d大鼠脾,从大鼠脾组织中分离纯化RNA,用DIG标记DNA探针作RNA斑点杂交,检测大鼠器官组织转铁蛋白受体mRNA基因表达情况.
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