【摘 要】
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目的用不同浓度的曲尼司特处理体外培养的人视网膜色素上皮细胞(hRPE-19细胞株),观察其对RPE细胞增殖的影响。方法1.体外培养人视网膜色素上皮细胞(hRPE-19细胞株)3-5代后,在倒置显
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目的用不同浓度的曲尼司特处理体外培养的人视网膜色素上皮细胞(hRPE-19细胞株),观察其对RPE细胞增殖的影响。方法1.体外培养人视网膜色素上皮细胞(hRPE-19细胞株)3-5代后,在倒置显微镜下、结合HE染色观察细胞形态,并用细胞角蛋白CK18对细胞进行鉴定。2.不同浓度的曲尼司特0(对照组)、12.5、25、50、100mg/l在作用hRPE-19细胞12h、24h、48h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组hRPE-19细胞的生长抑制率。3.分别采用蛋白质印迹法(Western Blot)和免疫组化法,观察不同浓度的曲尼司特作用细胞24h后其表达转化生成因子β1(TGF-β1)和血小板衍化生长因子受体A(PDGFR-A)蛋白的情况。结果1.体外培养的hRPE-19细胞为贴壁生长的不规则多角形细胞,细胞质内含少量的色素颗粒。细胞角蛋白CK18处理后细胞质为棕黄色阳性。2. MTT检测结果示作用相同时间时,随着曲尼司特浓度的增加,其对hRPE-19细胞的抑制率也渐增大,在一定范围内具有剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。3.蛋白质印迹法(Western Blot)显示在作用细胞24h时,随着曲尼司特浓度的增加,其对应条带的灰度值逐渐减小,表达TGF-β1和PDGFR-A蛋白量渐少,差异有统计学意义(P<0.05)。4.免疫组化结果说明TGF-β1蛋白定位于hRPE-19细胞浆,PDGFR-A蛋白定位于hRPE-19胞膜和胞浆,它们的表达量都随曲尼司特浓度的增加而减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论曲尼司特可以抑制人视网膜色素上皮细胞的增殖,并且在一定范围内具有剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05),其抑制增殖的机制可能与其下调TGF-β1和PDGFR-A蛋白表达有关。
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