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猪圆环病毒2型(Porcine cirovirus type2, PCV2)是引起猪圆环病毒相关疾病(Porcine circovirus-associated diseases, PCVAD)的主要病原,该病毒在世界范围内广泛流行,给养猪业带来巨大的经济损失。自2004年以来,国外陆续推出了PCV2灭活疫苗、重组Cap蛋白亚单位疫苗及嵌合病毒灭活苗；国内也研制成功PCV2灭活苗(LG和SH株)。这些商品化的PCV2疫苗对该病防控起到了重要作用。随着疫苗免疫不断推广,对疫苗免疫效果评价成为了一种现实需求。一方面,由于目前国内商品化的PCV2抗体检测试剂盒种类和厂家较多,产品质量各异,对诊断试剂盒的质量评价十分必要；另一方面,鉴别疫苗免疫及自然感染的抗体诊断方法也将成为临床中新的需求,目前尚无相关技术；此外,在临床条件下如何发挥疫苗的有效性,制定合理的免疫程序,对于提高该病的防控水平具有实际意义。因此针对上述问题,本研究开展了如下三部分研究工作。第一、开展了5种商品化的猪圆环病毒2型ELISA试剂盒检测质量的比较研究。采用IPMA方法标定不同PCV2抗体效价的阳性血清50份和阴性血清30份对这些试剂盒的敏感性,特异性及符合率进行比较。结果显示,这5种试剂盒的敏感性为74.0%～96.0%,特异性为83.3%-96.7%,符合率为77.5%-96.3%,其中以竞争ELISA试剂盒和Ingenasa公司的试剂盒质量最好。此外,采用竞争ELISA试剂盒对PCV2疫苗免疫猪血清抗体检测结果表明,疫苗免疫21d后抗体阳性率达50%,免疫28d抗体阳性率达100%;对PCV2人工感染猪血清抗体检测显示,病毒接种后第28d抗体阳性率为30%,第42d阳性率为100%;对临床送检猪血清抗体检测表明,PCV2抗体阳性率介于45%-76.5%。本研究为检测PCV2疫苗免疫效果评价提供了科学依据。第二、开展了PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗免疫与自然感染抗体鉴别诊断技术的研究。基于对PCV2-Rep’蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位的鉴定结果,本研究以Rep’蛋白抗原表位合成肽作为包被抗原,建立了一种间接ELISA方法,用于鉴别PCV2亚单位疫苗免疫和自然感染产生抗体的差异。经条件优化,确定抗原包被浓度为2μg/mL,血清稀释度为1：50,反应条件为37℃孵育1h,酶标二抗稀释度为1：2000,反应条件为37℃孵育30min,底物显色液(ABTS)室温孵育15min。当待检血清样品OD405≥0.298判为阳性,OD405≤0.255判为阴性,介于两者之间判为可疑。试验结果确定该方法的敏感性为90.8%(79/87),特异性为96.0%(96/100)。采用该方法对PCV2人工感染猪血清中Rep’抗体检测表明,感染后3w～4w抗体转阳；对PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗免疫猪血清检测显示,免疫后Rep’抗体始终呈阴性；此外,对临床送检583份猪血清样品中Rep’抗体检测,其阳性率达58.8%(343/583)。该方法为PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗免疫与自然感染鉴别诊断开辟了新途径。第三、在临床条件下开展了PCV2灭活苗(LG株)免疫程序的优化试验。为了比较PCV2灭活苗(LG株)不同免疫程序对临床仔猪的免疫效果,本研究依据不同的免疫时间、免疫剂量和免疫次数设计了10组免疫程序。在临床条件下,从试验猪场中选取2-4周龄仔猪50头,随机分组10组,每组5头。采用PCR和IPMA检测疫苗免疫血清中病毒核酸和抗体消长情况。检测抗体结果显示,对于疫苗单剂量一次免疫组,免疫后28d,4周龄仔猪PCV2抗体效价增长显著(p<0.05)；对于疫苗加强免疫组,免疫后28d各组抗体效价均显著提高(p<0.05)。病毒核酸检测显示,疫苗加强免疫组能够更好地清除病毒血症,4周龄仔猪疫苗单剂量免疫组效果次之。综合病毒核酸和抗体消长规律,推荐2种免疫程序：(1)加强免疫：首免3周龄单剂量免疫,间隔3w加强免疫；(2)一次性免疫：4周龄实施单剂量疫苗免疫。此外,仔猪疫苗免疫时母源抗体效价对疫苗免疫的影响试验表明,在低水平的母源抗体实施疫苗免疫时,免疫后产生的抗体水平较高,而高水平的母源抗体免疫时,仔猪抗体水平无明显变化。本研究对5种商品化诊断试剂盒进行了质量评价,有2种试剂盒质量较好；基于PCV2-Rep’蛋白抗原表位分析基础上,合成了多肽作为检测抗原,建立了一种间接ELISA方法,用于PCV2亚单位疫苗免疫和自然感染抗体的鉴别；在临床条件下优化了PCV2疫苗免疫程序。本研究为PCV2疫病防控技术提供了科学依据。