一种新的分泌蛋白基因NSP019的克隆和表达的研究

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目的 克隆一种新的分泌蛋白基因,对其生物学特性进行研究,为开发具有我国自主知识产权的有功能意义的新药奠定基础。方法 本研究应用生物信息学,寻找到一种新的分泌蛋白基因NSP019。通过引物设计,用PCR方法,从人脑垂体cDNA库中克隆到此基因,在与载体连接后,经核酸测序再分别导入原核和真核细胞进行表达,运用Western blot、Northern blot及亚细胞定位等方法,对克隆到的一种新的分泌蛋白基因NSP019及其表达产物进行研究。结果 生物信息学分析显示,NSP019基因含5716个碱基,开放阅读框架为726个碱基,翻译成共241个氨基酸的蛋白质,预计分子量约为27KD。通过SignalP、SeanProsite、CD-Search等软件分析,发现NSP019蛋白N-端有一段长度为32个氨基酸的疏水信号肽,并且含有一个谷胺酰胺富集区。定位在第二号染色体上,含有五个外显子。我们的实验结果显示,NSP019基因ORF为726bp,编码241个氨基酸,与生物信息学预测相符。Western blot及亚细胞定位证明NSP019基因编码的产物为一种分泌蛋白,Northern blot显示其在人体多组织均见表达。NSP019基因在原核系统中亦能表达,主要形成包涵体。通过GST系统我们得到了NSP019的纯化蛋白。结论 本研究证实我们所克隆的NSP019是一个新的具有分泌性的蛋白基因(GenBank的登录号:Accession NO.AF361495)。NSP019蛋白与细胞发育、胞内蛋白的调控有关,可能在肿瘤发生、细胞凋亡、细胞保护等方面发挥作用,其作用途径和机理有待进一步研究。
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