量子点荧光探针的制备及其在金黄色葡萄球菌检测中的应用

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水溶性量子点是一种有着优良光学特性的半导体纳米微粒,可在生命科学研究中作为荧光探针和标记。与传统的有机染料荧光探针相比,它具有激发光谱宽、发射光谱对称且半峰宽窄、光化学稳定性高、谱带分布连续以及抗光漂白能力强等特点。本文以CdSe/ZnS量子点为研究对象,改进其水相合成法,并应用于致病菌的检测,主要开展了以下两个方面的工作:1.水相合成CdSe、CdSe/ZnS量子点。为解决在非水相中合成量子点的毒性大、反应条件苛刻、非水溶性等问题,本研究以NaHSe为前体、巯基乙酸为稳定剂合成了的水溶性CdSe量子点,并在CdSe量子点基础上合成了具有更高量子产率的CdSe/ZnS核壳量子点。着重考察了稳定剂、pH值、反应量等因素对量子点荧光特性的影响,并对制备后的粗产品进行了提纯,以及用荧光光谱、透射电子显微镜等对合成的量子点进行了表征。实验结果表明,该制备方法简单而快速,最终能得到具有良好的荧光性能和稳定性的水溶性CdSe、CdSe/ZnS量子点。2.检测含毒性休克综合征毒素-1基因的金黄色葡萄球菌。利用量子点(QD)作为供体、黑洞猝灭染料(BHQ)为受体的荧光猝灭原理,建立了一种新的快速检测含毒性休克综合征毒素-1基因的金黄色葡萄球菌的方法。在本检测体系中,羧基修饰的量子点(530nm)与氨基修饰的DNA在EDC作用下脱水结合形成量子点核酸探针,再互补结合BHQ(530nm)修饰的DNA, QD即发生荧光猝灭。当加入靶序列后,靶序列通过更强的亲和力与QD-DNA探针杂交而BHQ与QD分离,QD复合物的荧光复原。而加入误配碱基序列和其它菌的DNA时,量子点的荧光强度不会复原。实验结果表明,通过检测QD荧光的变化可对携带tst基因的金黄色葡萄球菌进行定量检测,且此检测方法具有高的灵敏性和特异性。该方法中目标DNA的浓度与量子点复原的荧光强度与呈良好的线性关系,线性范围为0.2~1.2μM,目标DNA的检测下限可达0.2μM。
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