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背景急性心肌梗死严重影响着患者的生命健康,及时的冠脉再通是拯救急性心肌梗死患者生命和改善患者预后的关键。随着胸痛中心在全国范围内的广泛建立,绿色通道的高效运作使得大部分急性心肌梗死患者得到较及时的冠脉再通,挽救了患者生命。然而冠脉再通往往可伴随着缺血再灌注损伤,对心肌造成进一步的伤害,因此寻找减轻心肌缺血再灌注损伤的方法意义重大。研究表明,在心肌缺血再灌注损伤过程中,心肌细胞的死亡方式主要为坏死。坏死性凋亡作为一种可调控的细胞坏死方式,也参与到心肌缺血再灌注损伤中。长链非编码RNA（lncRNA）是一种长度大于200个核苷酸,缺乏特异开放性阅读框且不编码蛋白质的序列,主要在转录、翻译水平调控目的基因的表达情况。研究表明lncRNA可调控心肌细胞的坏死性凋亡。有文献表明,坏死性凋亡相关蛋白RIPK1,RIPK3参与心肌细胞肥大的调控进程,提示心肌肥厚与坏死性凋亡相关通路可能存在交叉联系。lncRNA Chaer是一种调控心肌细胞肥大水平的长链非编码RNA,而lncRNA Chaer是否参与心肌缺血再灌注损伤中心肌细胞坏死性凋亡的调节尚未见报道。目的探索lncRNA Chaer在小鼠心肌缺血再灌注损伤中心肌坏死性凋亡的作用及潜在机制,为减轻心肌缺血再灌注损伤寻找新的治疗靶点。方法1.利用SPF级8-10周龄C57/BL6小鼠建立心肌缺血再灌注损伤模型,取材,行western blot观察心肌坏死性凋亡相关蛋白的表达情况;行实时荧光定量PCR检测lncRNA Chaer的表达情况;利用日龄1-3天的C57/BL6小鼠乳鼠提取原代心肌细胞,行缺氧复氧实验模拟体内缺血再灌注损伤过程,行western blot观察心肌细胞坏死性凋亡相关蛋白的表达情况;行实时荧光定量PCR检测lncRNA Chaer的表达情况;2.订制lncRNA Chaer特异性小干扰RNA（siRNA-Chaer）,按照产品说明书转染原代心肌细胞,转染完毕后提取心肌细胞RNA,行实时荧光定量PCR检测lncRNA Chaer的沉默效果;3.利用siRNA-Chaer转染原代心肌细胞,转染完毕后行缺氧复氧实验,提取蛋白行WB实验检测坏死性凋亡相关蛋白的表达情况,PI染色及CCK8实验观察细胞存活情况;4.订制lncRNA Chaer特异性腺病毒过表达载体（Adv-Chaer）,按照产品说明书转染原代心肌细胞,转染完毕后提取心肌细胞RNA行实时荧光定量PCR检测lncRNA Chaer的过表达效果;5.利用Adv-Chaer转染原代心肌细胞,转染完毕后行缺氧复氧实验,提取蛋白行WB实验检测坏死性凋亡相关蛋白的表达情况,PI染色及CCK8实验观察细胞存活情况;6.订制lncRNA Chaer特异性慢病毒沉默载体（Lenti-sh Chaer）,于小鼠心脏左前降支支配区域原位多点注射慢病毒沉默载体,2周后取材提取心脏组织RNA行实时荧光定量PCR检测lncRNA Chaer的在体沉默效果;7.在体敲低心肌lncRNA Chaer后,行心肌缺血再灌注损伤实验,取材,提取蛋白观察坏死性凋亡相关蛋白的表达情况;行伊文思蓝/TTC双染实验,观察心肌梗死面积大小;行超声心动图,观察小鼠的心功能情况;8.利用Adv-Chaer转染原代心肌细胞,应用RIPK1抑制剂necrostatin-1（nec-1）,处理心肌细胞,行缺氧复氧实验,提取蛋白行WB实验检测坏死性凋亡相关蛋白的表达情况,PI染色及CCK8实验观察细胞存活情况。结果1.小鼠心肌缺血再灌注损伤模型中,坏死性凋亡相关蛋白表达较对照组明显增多,lncRNA Chaer表达显著提高;离体缺氧复氧实验中,缺氧复氧组原代心肌细胞坏死性凋亡相关蛋白表达较对照组明显增多,lncRNA Chaer表达显著提高;2.实时荧光定量PCR结果显示,siRNA-Chaer转染组lncRNA Chaer表达显著下调,下降幅度约70%,沉默成功;3.缺氧复氧处理后,siRNA-Chaer转染组中坏死性凋亡相关蛋白表达、PI阳性细胞病例明显低于对照组,CCK8实验结果显示siRNA-Chaer组细胞活性优于对照组;4.实时荧光定量PCR结果显示,Adv-Chaer转染组lncRNA Chaer表达显著上调,过表达成功;5.缺氧复氧处理后,Adv-Chaer转染组中坏死性凋亡相关蛋白表达、PI阳性细胞病例明显高于对照组,CCK8实验结果显示Adv-Chaer转染组细胞活性劣于对照组;6.实时荧光定量PCR结果显示,Lenti-sh Chaer心肌原位注射组中lncRNA Chaer表达显著下调,在体沉默成功;7.在体敲低心肌lncRNA Chaer后,行心肌缺血再灌注损伤实验,Lenti-sh Chaer组中心肌坏死性凋亡相关蛋白表达较对照组下降,心肌梗死面积减少,小鼠心功能指标EF、FS优于对照组;8.RIPK1抑制剂nec-1处理后,RIPK1、RIPK3及p-MLKL表达明显较对照组下降,PI阳性细胞比例下降,CCK8提示活性较对照组提高。结论1.心肌缺血再灌注损伤中坏死性凋亡水平上调;LncRNA Chaer在心肌缺血再灌注损伤中表达增高;下调lncRNA Chaer可以减少心肌缺血再灌注损伤中的坏死性凋亡,减少心肌梗死面积,保护小鼠心功能。2.LncRNA Chaer在缺氧复氧过程中可通过RIPK1/RIPK3/MLKL途径调节心肌细胞坏死性凋亡。