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沙拉沙星(Sarafloxacin，SARA)是新型的动物专用药，于1995年在美国上市，是美国第一个被批准用于动物性食品的氟喹诺酮类药物，该药是广谱抗菌药。由于其具有良好的杀菌效果、且价格低廉而被广泛使用。虽然SARA被批准用于对大肠杆菌等病菌的治疗，但是若氟喹诺酮类药在动物源食品中残留而被人食用，可能会加速人类病原体对抗生素耐药性。国内规定SARA的最高残留量为80μg/Kg。目前，氟喹诺酮类药物的检测的常规方法包括紫外分光光度测定、高效液相色谱、时间分辨化学发光法等。以上检测方法的精确度和灵敏度都很高，这些检测方法需要的设备比较昂贵，且样品前期处理较为繁琐，只能限于实验室内检测，不能满足现场快速监测食品中残留的需要，故需建立一种能快速准确检测SARA残留且成本较低的检测方法。酶联免疫吸附法(ELISA)是一种具有简便易操作、检测快，灵敏度和准确度高，能实现现场检测等特点的检测方法，且成本较低，能够弥补大型仪器所带来的不足。近年来随着ELISA的不断发展，ELISA在农药和兽药快速检测方面已经得到广泛应用。建立SARA的ELISA检测方法需要制备SARA的单克隆抗体，由于SARA是小分子物质，属于半抗原，自身有反应原性却无免疫原性，所以SARA需要与大分子物质相结合，通过人工的方法合成免疫原，SARA才能获得免疫原性，然后通过免疫小鼠获得小鼠多抗血清，进而制备SARA单克隆抗体和建立ELISA检测方法。本研究根据ELISA在检测方面的特点和优点，通过人工合成免疫原SARA-BSA，免疫小鼠而获得高亲和特异性多抗血清，为制备SARA单克隆抗体和建立SARA ELISA检测方法奠定基础。1．人工抗原的合成与鉴定采用碳二亚胺法（EDC法），分别将沙拉沙星(SARA)与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联，制备了免疫原SARA-BSA和包被原SARA-OVA。通过使用紫外扫描法（UV）、SDS-PAGE凝胶电泳对免疫原SARA-BSA和包被原SARA-OVA进行了初步鉴定。根据鉴定结果，初步证明SARA人工抗原制备成功。2．单克隆抗体的制备与鉴定选择多克隆抗体效价高、特异性好的小鼠进行融合，利用单克隆抗体技术，结合ELISA筛选体系，最终成功筛选出可以稳定产生亲和力好、特异性强的抗SARA单克隆抗体的杂交瘤细胞株2株，其编号分别为1G3、3H3，用体内诱生腹水法制备腹水，经纯化后鉴定，抗体的效价为1：5.12×105，IC50=6.34ng/mL，亲和常数分别为8.55×108L/mol，SARA抗体与诺氟沙星的交叉反应率为1.06%，与同类药物及其他类药物的竞争交叉反应率均小于0.5%。3．SARA间接竞争ELISA快速检测试剂盒的组装利用制备的SARA单克隆抗体和间接竞争ELISA检测原理，组装了SARA间接竞争ELISA试剂盒。试剂盒的标准曲线呈典型S型，相关线性回归方程为y=-0.3848x+0.7363，R2为0.9901，根据回归方程计算出IC50=4.11ng/mL。试剂盒的特异性很好，与其他药物交叉反应率低于1%，检测限为2.06ng/mL，对鸡肝和鸡肉进行2ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL等4个梯度的标准品添加试验，添加试验的平均回收率分别为85.3%和88.7%，批内和批间平均变异系数均小于15%，在4℃下保存180d无显著变化。研制的试剂盒具有很好的特异性、重复性、灵敏度、精密度、准确性及稳定性。可以实现对SARA残留快速检测的需要。