【摘 要】
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目的体外建立白色假丝酵母菌(candida albicans C.a)感染人口腔黏膜上皮细胞(h OMECs)模型,探讨人重组白介素17A(rh IL-17A)对h OMECs表达β-防御素(h BDs)、S100A8及LL-37的
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目的体外建立白色假丝酵母菌(candida albicans C.a)感染人口腔黏膜上皮细胞(h OMECs)模型,探讨人重组白介素17A(rh IL-17A)对h OMECs表达β-防御素(h BDs)、S100A8及LL-37的影响及其抑制C.a感染h OMECs的作用。方法1.观察C.a感染h OMECs过程中rh IL-17A抑制C.a感染h OMECs的情况。进一步采用100μg/L rh IL-17A处理C.a 24h后,激光共聚焦显微镜下观察rh IL-17A对C.a生长繁殖及形态结构的影响。2.探索不同浓度的rh IL-17A对h OMECs表达h BDs的影响:选用1、10、100、1000μg/L的rh IL-17A分别刺激h OMECs 48h,采用ELISA和RT-PCR分别检测h BD-1,2,3的蛋白及m RNA表达水平。3.将细胞随机分为4组:空白对照组;单独C.a处理组(模型组);单独rh IL-17A处理组;rh IL-17A与C.a处理组(实验组)。用C.a感染h OMECs2h(感染复数MOI=0.1),建立C.a感染h OMECs模型,再用100μg/L的rh IL-17A处理h OMECs或感染C.a的h OMECs模型24 h,收集细胞培养上清液,稀释后重新接种到沙氏培养基中,通过数菌落数计算C.a黏附率。ELISA方法检测上清液中h BD-1,2,3水平,RT-PCR检测贴壁细胞的h BD-1,2,3、S100A8、LL-37的m RNA表达水平。结果1.C.a感染h OMECs过程中,光镜下可见C.a形成菌丝并感染h OMECs引起细胞死亡,而在rh IL-17A的作用下,实验组中C.a无菌丝形成,无C.a感染h OMECs;激光共聚焦显微镜观察到在rh IL-17A作用下的C.a生长繁殖停止,无菌丝及菌落形成。2.与模型组比较,在rh IL-17A的作用下,C.a对h OMECs的黏附率降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。3.RT-PCR结果显示,10、100、1000μg/L的rh IL-17A均能诱导h OMECs表达h BD-2,分别与空白对照组比较均有统计学差异,(P<0.05),各浓度组两两比较均具有统计学差异(P<0.05)。ELISA结果显示,1、10、100、1000μg/L的rh IL-17A均能诱导h OMECs表达h BD-2,分别与空白对照组比较均有统计学差异,(P<0.001),各浓度组两两比较均具有统计学差异(P<0.001),100μg/L组h BD-2 m RNA水平及蛋白水平升高最为显著。4.h OMECs中的h BD-2水平在C.a及100μg/L的rh IL-17A的诱导下呈表达上调,(P<0.05),rh IL-17A诱导能力高于模型组,差异有统计学意义,(P<0.05);在C.a的激惹下,h BD-2表达水平均高于模型组和rh IL-17A组,(P<0.05)。S100A8 m RNA、LL-37 m RNA水平在C.a的诱导下表达下降,(P<0.05),在rh IL-17A的刺激下呈表达上调(P<0.05),S100A8 m RNA表达趋势与LL-37 m RNA一致。结论rh IL-17A可能通过抑制白色假丝酵母菌的生长繁殖及菌丝的生成,从而抑制白色假丝酵母菌感染口腔黏膜上皮细胞。另外rh IL-17A还可能通过诱导口腔黏膜上皮细胞分泌h BD-2、S100A8、LL-37,在口腔黏膜上皮细胞中共同发挥抗感染作用。
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