【摘 要】
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目的:探讨新生鼠肝脏MΦ受RRV刺激活化后分泌及表达的可调控肝脏NK细胞功能的细胞因子及膜配体的变化方法:RRV分别刺激新生小鼠和成年小鼠肝脏MΦ 12h、24h、36h、48h及60h,然后在上述时间点检测细胞上清液中IL-12、IL-23、IL-10及TNF-α的浓度及肝脏MΦ表达Rae-1、CD40阳性细胞比例,确立峰值浓度的作用时间点。结果:新生小鼠肝脏MΦ分泌的IL-12、IL-23、T
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目的:探讨新生鼠肝脏MΦ受RRV刺激活化后分泌及表达的可调控肝脏NK细胞功能的细胞因子及膜配体的变化方法:RRV分别刺激新生小鼠和成年小鼠肝脏MΦ 12h、24h、36h、48h及60h,然后在上述时间点检测细胞上清液中IL-12、IL-23、IL-10及TNF-α的浓度及肝脏MΦ表达Rae-1、CD40阳性细胞比例,确立峰值浓度的作用时间点。结果:新生小鼠肝脏MΦ分泌的IL-12、IL-23、TNF-α及表达的CD40均低于成年小鼠（P<0.05）,但新生小鼠分泌肝脏MΦ分泌的IL-10及表达的Rae-1要高于成年小鼠（P<0.05）。新生小鼠IL-12、IL-23、IL-10及TNF-α的峰值浓度作用时间分别为24h、24h、60h、12h,成年小鼠的IL-12、IL-23、IL-10及TNF-α的峰值浓度作用时间分别为36h、36h、36h、48h;新生小鼠Rae-1及CD40阳性峰值细胞比例的时间分别为24h、24h,成年小鼠Rae-1及CD40阳性峰值细胞比例分别为48h、36h。结论:新生小鼠肝脏MΦ表达IL-12、IL-23、TNF-α及CD40明显低于成年小鼠,而Rae-1、IL-10的表达高于成年小鼠。第二部分:新生小鼠巨噬细胞对肝脏NK细胞调控不足的关键细胞因子探讨目的:探讨RRV刺激后新生鼠肝脏MΦ调控肝脏NK细胞的关键细胞因子的变化方法:分别将新生小鼠和成年小鼠的肝脏MΦ和肝脏NK细胞共培养后给予RRV刺激,分别在IL-12及IL-10的峰值浓度时间点处中和IL-12及IL-10,评估阻断前后不同年龄小鼠NK细胞CD69及胞内IFN-γ、TNF-α的表达水平。结果:IL-12阻断后,新生小鼠CD69的表达较阻断前下降（P<0.05）,而成年小鼠CD69的表达并无显著性差异（P>0.05）;新生小鼠、成年小鼠阻断前后NK细胞表达IFN-γ均无显著性差异（P>0.05）;新生小鼠NK细胞的TNF-α阻断前后无明显变化（P>0.05）,但成年小鼠NK的TNF-α阻断后明显降低（P<0.05）。IL-10阻断后,新生小鼠CD69、IFN-γ的表达明显升高（P<0.05）,而成年小鼠在IL-10阻断前后,CD69、IFN-γ的表达并无显著性差异（P>0.05）。新生小鼠NK细胞的TNF-α无明显变化（P>0.05）,但成年小鼠NK的TNF-α明显升高（P<0.05）。结论:IL-1对成年小鼠NK细胞表达TNF-α的促进作用及IL-10对TNF-α表达的抑制作用均大于新生小鼠。IL-12并非决定NK细胞胞内IFN-γ的关键因素,新生小鼠IL-10对NK细胞IFN-γ的调控不足可能是发生BA的原因第三部分:新生小鼠巨噬细胞对肝脏NK细胞调控不足的关键细胞连接信号的探讨目的:探讨RRV刺激后新生鼠肝脏MΦ调控肝脏NK细胞的关键膜蛋白配体。方法:分别将新生小鼠和成年小鼠的肝脏MΦ和肝脏NK细胞共培养后给予RRV刺激,分别在Rae-1及CD40的峰值阳性细胞比例时间点处阻断Rae-1及CD40,评估阻断前后不同年龄小鼠NK细胞CD69及胞内IFN-γ、TNF-α的表达水平。结果:CD40阻断后新生及成年小鼠NK细胞TNF-α、CD154表达下调,阻断前后IFN-γ无明显变化。Rae-1阻断后,新生小鼠肝脏NK细胞表达IFN-γ明显下降,而成年小鼠无明显变化;不同年龄小鼠肝脏CD69、TNF-α的表达在Rae-1阻断前后无改变,而NKG2D的表达在阻断前后均有显著性差异。结论:肝脏MΦ-NK之间的Rae-1/NKG2D、CD40-CD154信号有助于新生小鼠NK细胞内IFN-γ及TNF-α的表达。Rae-1/NKG2D的信号通路在新生小鼠NK细胞中的过度活化,可能是导致BA的一个信号通路。
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