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第一部分高浓度氧暴露对N9小胶质细胞功能的影响目的：探讨高浓度氧暴露对N9小胶质细胞生存能力及氧化应激、促炎症反应功能的影响。方法：体外培养N9小胶质细胞,建立高浓度氧损伤细胞模型,在95%高氧暴露2h、6h、12h、16h、24h后(1)观察N9小胶质细胞形态变化；(2)DHE荧光探针观测超氧化阴离子的变化；(3) DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS含量的变化；(4)RT-PCR检测TLR4及TNF-α, IL-1β mRNA表达的变化；(5)免疫荧光化学染色观测TLR4蛋白表达的变化；(6)ELISA检测细胞上清中TNF-α、IL-1β的含量；(7)流式细胞术检测细胞存活率及凋亡率。结果：高浓度氧暴露后N9小胶质细胞形态由静息态转化为激活态,细胞内ROS、超氧阴离子较对照组在高氧暴露2h后即有增高(P<0.05),并随暴露时间延长而增加；TLR4及TNF-α、IL-1β mRNA表达均在一定时间范围内呈时间依赖性增强(P<0.05),但表达时序上存在差异,TLR4mRNA在2h开始上调,TNF-α、IL-1β mRNA均在6h上调；免疫荧光化学染色显示高氧暴露12h后TLR4表达较对照组增强,主要在胞浆、胞膜上表达；细胞上清内TNF-α、IL-1β均在高氧暴露6h后随时间延长而增加(P<0.05)；高氧暴露12h后细胞凋亡率较对照组增加(P<0.05),16h最高。结论：高氧暴露激活体外培养的N9小胶质细胞,增强氧化应激、促炎症反应,并能导致自身凋亡；高氧暴露后小胶质细胞内可能存在ROS-TLR4-促炎性介质释放途径激活。第二部分脂多糖处理后高浓度氧对小胶质细胞功能的影响及分子机制研究目的：探讨LPS与高浓度氧对小胶质细胞的共同效应,及氧化应激、TLR4信号通路在高浓度氧活化小胶质细胞中的作用。方法：体外培养N9小胶质细胞(TLR4野生型)及EOC20小胶质细胞(TLR4敲出型),建立不同浓度LPS处理后高氧损伤N9细胞模型,95%高氧暴露2h、6h、12h、16h、24h后(1) DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS含量的变化；(2) RT-PCR检测TLR4mRNA表达时序变化;(3)Western-blot检测TLR4蛋白表达；(4)ELISA检测细胞上清中TNF-α含量。通过抗氧化剂NAC干预、TLR4功能缺失(EOC20)观测95%高氧暴露后ROS含量、NF-κB核转录活性、细胞上清中TNF-α含量变化。结果：高浓度氧暴露可增强LPS诱导的N9小胶质细胞ROS活性,TNF-α表达明显增高,同时下调TLR4的表达,呈一定时间依赖性,且调控幅度与LPS浓度有关,高浓度较低浓度高氧暴露后变化更为显著。抗氧化剂NAC干预后,核转录因子NF-κB(?)舌性明显降低,细胞上清内TNF-α水平亦显著下调,EOC20高浓度氧暴露后呈现出相识的变化,并且二者结合效应更为显著。结论：LPS处理后高氧暴露对小胶质细胞活化具有协同效应,ROS或TLR4可成为调控高浓度氧对小胶质细胞生物效应的关键分子,二者结合作用更加显著。第三部分脂多糖致敏高浓度氧对新生小鼠未成熟脑损伤的研究目的：探讨低浓度LPS处理后高浓度氧对新生小鼠未成熟脑损伤的影响及其作用机制方法：48只PND3新生小鼠分为空气组、LPS处理组、高氧组、高氧+LPS组,高氧+LPS组采用LPS腹腔注射(0.3mg/kg)30min后95%高浓度氧暴露24h,LPS处理组、高氧组给予相应单因素处理,PND5断头取脑：(1)Tomato lectin免疫组化染色观测脑室周围白质小胶质细胞形态变化；(2)检测脑组织内脂质氧化物MDA含量；(3)real-time PCR检测TNF-α、 mRNA表达变化；(3)western-blot检测capsase-3蛋白表达；(5)电镜观察脑室周围白质超微结构变化。结果：Tomato lectin染色显示LPS组、高氧组及LPS+高氧组均可见脑室周围白质内小胶质细胞由静息态转化为激活态,高氧组激活的小胶质细胞数、脑内MDA含量、TNF-α、 mRNA表达、caspase-3蛋白表达均高于空气组、LPS组(P<0.05), LPS处理后高氧暴露(LPS+高氧组)能显著增强小胶质细胞活化效应(P<0.05)。电镜超微结构观察亦证实,LPS处理后高氧暴露导致更为明显的细胞凋亡。结论：高浓度氧暴露诱导小胶质细胞活化致未成熟脑损伤,低浓度LPS处理后能致敏上述效应。