论文部分内容阅读
通过Morris水迷宫实验，检测4组小鼠的空间学习和记忆能力差异。 潜在治疗药物尚无相关研究。由此，我们提出研究假说，通过MTM特异性抑制Sp1的过表达，是否可改善AD的认知缺陷及神经病理学异常？针对这一研究假说，我们分别给予野生型C57BL/6小鼠和APPswe/PS1dE9双转基因小鼠连续60天的PBS和MTM腹腔注射后，通过动物行为学、组织形态学以及分子生物学等研究手段来比较各组的行为认知和神经病理学差异，从而阐明 MTM特异性抑制Sp1过表达对AD的潜在治疗作用。 研究方法： 1.通过Morris水迷宫实验，检测4组小鼠的空间学习和记忆能力差异。 2.通过免疫组织化学实验，检测4组小鼠脑组织切片Aβ斑块沉积差异。 3.通过ELISA实验，检测4组小鼠脑组织匀浆中Aβ含量的差异。 4.通过实时定量PCR实验，检测4组小鼠脑组织中导致Aβ沉积和Tau异常活化关键分子mRNA水平的差异。 5.通过蛋白印迹实验，检测4组小鼠脑组织中导致Aβ沉积、Tau异常活化和突触缺失关键分子蛋白水平的差异。 研究结果： 1. APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中Sp1的转录和蛋白表达水平显著高于野生型C57BL/6小鼠（p<0.001），MTM可显著抑制APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中Sp1的转录和蛋白表达水平（p<0.001），而MTM对野生型C57BL/6小鼠脑组织中Sp1水平无显著影响（p>0.05）。 2.APPswe/PS1dE9转基因小鼠的空间学习和记忆能力显著差于野生型C57BL/6小鼠（p<0.01和p<0.05），MTM可显著改善APPswe/PS1dE9转基因小鼠的空间学习和记忆能力（p<0.05和p<0.01），而对野生型C57BL/6小鼠的空间学习和记忆能力无显著改变（p>0.05和p>0.05）。 3.与PBS处理的APPswe/PS1dE9转基因小鼠相比，MTM可显著降低APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中Aβ的含量以及淀粉样斑块沉积的数目和面积（p<0.01和p<0.001）。 4.APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中APP的转录、蛋白表达以及p-APP水平显著高于野生型 C57BL/6小鼠（p<0.001和 p<0.001）， MTM可显著降低APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中APP的转录和蛋白表达水平，p-APP的蛋白表达水平（p<0.001和p<0.001），而对野生型C57BL/6小鼠脑组织中的APP的转录和蛋白表达水平以及p-APP的蛋白表达水平无显著影响（p>0.05和p>0.05）。此外，MTM可显著降低APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中sAPPβ的蛋白表达水平（p<0.01），而对sAPPα的蛋白表达水平无显著影响（p>0.05）。 5.APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中BACE1和PS1的转录和蛋白表达水平显著高于野生型 C57BL/6小鼠（p<0.001和 p<0.001）， MTM可显著降低APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中 BACE1和 PS1的转录和蛋白表达水平（p<0.001和p<0.001），而对野生型C57BL/6小鼠脑组织中BACE1和PS1的转录和蛋白表达水平无显著影响（p>0.05和p>0.05）。 6.APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中p-tau205和p-tau235的蛋白表达水平显著高于野生型C57BL/6小鼠（p<0.001），MTM可显著降低APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中p-Tau205和p-Tau235的蛋白表达水平（p<0.001）；MTM也可显著降低APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中Tau的转录和蛋白表达水平（p<0.01）。而且，APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中p-GSK3β和p-CDK5的蛋白表达水平显著高于野生型C57BL/6小鼠（p<0.001），MTM可显著降低APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中p-GSK3β和p-CDK5的蛋白表达水平（p<0.001）。此外，MTM也可显著降低APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中CDK5的转录和蛋白表达水平（p<0.001）。 7.APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中SYP和MAP2的蛋白表达水平显著低于野生型C57BL/6小鼠（p<0.001），MTM可显著升高APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中SYP和MAP2的蛋白表达水平（p<0.001），而对野生型C57BL/6小鼠脑组织中SYP和MAP2的蛋白表达水平无显著影响（p>0.05）。 研究结论： 1.MTM可特异性抑制APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中Sp1的转录和蛋白表达。 2.MTM可显著改善APPswe/PS1dE9转基因小鼠的空间学习和记忆能力。 3.MTM可显著降低APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中Aβ的产生和沉积 4.MTM可显著改变APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中淀粉样斑块的代谢过程。 5.MTM可显著抑制APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中β-淀粉样斑块沉积的病理途径。 6.MTM可显著抑制APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中Tau蛋白异常活化的病理途径。 7.MTM可显著改善APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织中的突触传递异常。