【摘 要】
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利用纤维蛋白平板筛选、纤溶活性测定和体外溶栓实验相结合的方法,从豆豉中筛选到纤溶活性较高的体外溶栓效果良好的菌株DC-2和DC-4,经鉴定分别为枯草杆菌和解淀粉芽孢杆菌,
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利用纤维蛋白平板筛选、纤溶活性测定和体外溶栓实验相结合的方法,从豆豉中筛选到纤溶活性较高的体外溶栓效果良好的菌株DC-2和DC-4,经鉴定分别为枯草杆菌和解淀粉芽孢杆菌,它们产生的溶栓酶分别命名为枯草杆菌豆豉溶栓酶（BS-DFE）和解淀粉芽孢杆菌豆豉溶栓酶（BA-DFE）.尚未见有关解淀粉芽孢杆菌能产生溶栓酶的报道.进行单因素实验和正交分析,优化了解淀粉芽孢杆菌DC-4产生BA-DFE的发酵条件,其纤溶活性达到820U/mL.根据BA-DFE的N-端序列与Subtilisin BPN高度同源设计引物,PCR扩增出BA-DFE成熟肽编码序列.运用PCR技术克隆到BA-DFE的完整基因,编码382个氨基酸,由信号肽、前导肽和成熟肽组成.将BA-DFE基因克隆到大肠杆菌--枯草杆菌穿梭载体pSUGV4上,并在枯草杆菌WB600中进行了分泌表达.表达产物的酶学性质与原始菌株产生的BA-DFE一致.为了探索枯草杆菌DC-2是否存在与纳豆激酶（NK）同源的基因,根据NK基因设计引物,PCR扩增出BS-DFE编码区序列,其核苷酸和氨基酸序列与NK分别有93.4﹪和94.5﹪的同源性.采用pGEX-4T-1表达载体,BS-DFE在大肠杆菌中进行了高效表达.
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