【摘 要】
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目的:缺血性肾脏疾病（ischemic renal disease,IRD）的临床发病率逐年上升,它会导致肾脏损害、肾功能丧失,并最终导致终末期肾脏病（end-stage renal disease,ESRD）的发生。脂联素（adiponectin,APN）是最近发现的一种由脂肪组织分泌的胶原蛋白样蛋白,在调节能量代谢和炎症中发挥着重要作用。然而,APN对IRD的具体作用机制尚不清楚。因此,本项研
【基金项目】
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辽宁省自然科技基金（No.20170541057）；
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目的:缺血性肾脏疾病（ischemic renal disease,IRD）的临床发病率逐年上升,它会导致肾脏损害、肾功能丧失,并最终导致终末期肾脏病（end-stage renal disease,ESRD）的发生。脂联素（adiponectin,APN）是最近发现的一种由脂肪组织分泌的胶原蛋白样蛋白,在调节能量代谢和炎症中发挥着重要作用。然而,APN对IRD的具体作用机制尚不清楚。因此,本项研究旨在体外和体内两部分探讨研究APN影响IRD症状的具体机制。研究方法:第一部分:在体外,我们培养了HK-2细胞,并用经典的Co Cl2来部分模拟IRD的细胞缺氧模型,HK-2细胞被随机地分为4组:正常组,单独APN处理组,Co Cl2诱导缺氧模型组,Co Cl2与APN联合处理组。（1）采用流式凋亡技术对各组细胞的凋亡率进行了检测;（2）通过光镜观察各组细胞的形态变化;（3）通过Mito SOX荧光染料进行活性氧的检测;（4）通过Western blot技术检测了抑凋亡蛋白Bcl-2,促凋亡蛋白Bax、Fas,三种相关蛋白STC-1、UCP2、UCP3以及炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的蛋白表达水平。第二部分:在体内,我们构造了IRD的小鼠模型,小鼠分为4组:野生型小鼠对照组（WT Control）,野生型小鼠模型组（WT IRD）,APN敲除小鼠对照组（APN-/-Control）,APN敲除小鼠模型组（APN-/-IRD）。（1）我们通过HE染色和天狼星红染色观察肾脏结构有无改变;（2）通过免疫组织化学法检测缺氧诱导因子HIF-1α和HIF-1β的表达水平;（3）通过体外对肾组织切片进行TUNEL染色来检测肾细胞的凋亡。结果:第一部分:（1）用不同浓度的Co Cl2（200、400、600、800μM）处理HK-2细胞24 h后,与正常组比较,600、800μM的Co Cl2导致HK-2的凋亡率明显增加,而200、400μM的Co Cl2作用不明显;在Co Cl2处理的基础上,采用不同浓度的APN（1、2.5、5μg/ml）进行干预处理24 h后,结果发现与Co Cl2组相比,3个浓度处理组的凋亡率均有所下降,但2.5μg/ml的APN处理组降低凋亡率的效果要比其余两组更明显;（2）光镜下观察到,正常组细胞呈梭形,胞膜完整,生长良好;APN组细胞形态无变化;Co Cl2组细胞形态明显变圆、细胞皱缩、出现细胞碎片;Co Cl2与APN联合处理组大部分细胞形态由圆形恢复至梭形,但也有少量细胞碎片;（3）正常组和单独APN组的细胞呈现微弱的红色Mito SOX荧光,在Co Cl2处理后,细胞呈现出明亮的红色荧光,而在Co Cl2与APN联合处理组中,与Co Cl2组相比,红色荧光的强度明显减弱;（4）与正常组比较,在应用Co Cl2处理诱导后,抑凋亡蛋白Bcl-2表达下降,促凋亡蛋白Bax和Fas的表达明显上升,炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平也明显上升;在给予APN联合处理后,与Co Cl2组比较,APN增加了抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,而抑制了促凋亡蛋白Bax和Fas的表达,同时也抑制了炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达;结果也发现,STC-1和UCP3参与了APN发挥保护作用的过程。第二部分:（1）与野生型小鼠相比,IRD小鼠发生了肾小球硬化,APN基因敲除后小鼠的肾小球发生明显的肥大,而且肾小管的胶原纤维数量也明显增加;（2）与野生型小鼠相比,IRD小鼠缺氧诱导因子HIF-1α和HIF-1β的表达量有所增加,在APN基因敲除后,HIF-1α和HIF-1β的表达量出现明显的增加;（3）与野生型小鼠相比,IRD小鼠的肾组织细胞凋亡数量有所增多,在APN基因敲除后,小鼠的肾组织细胞的凋亡数量显著增加。结论:1.APN可以改变Co Cl2诱导引起的HK-2细胞形态变化,防止细胞凋亡。2.APN可以减少ROS的产生。3.APN具有明显抑制肾小管上皮细胞凋亡和炎症反应的作用,并且STC-1和UCP3参与APN发挥保护作用的过程。4.APN基因的敲除加剧了肾脏结构的损伤。5.APN基因的敲除增加了小鼠肾脏组织HIF-1α和HIF-1β的表达。6.APN基因的敲除加剧了小鼠肾脏组织的细胞凋亡。
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