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目的:分析负性共刺激分子Tim3和Pd-1在多发性骨髓瘤(MM)患者T细胞上的表达特征及其作用,进一步探讨:Tim和Pd-1在T细胞表达的临床意义及介导的MM免疫逃逸机制。方法:1.收集34例初诊MM患者临床资料。2.采集34例患者治疗前后外周血及骨髓液标本,以同期14例健康志愿者外周血和11例非恶性血液病患者骨髓液标本作为正常对照;经过免疫荧光标记和流式细胞仪计数动态检测分析Tim3和Pd-1在MM患者T细胞上的表达特征。3.探讨化疗对MM患者T细胞上Tim3和Pd-1表达水平的影响。4.分析Tim3和Pd-1在MM患者T细胞上表达的临床意义。5.经胞膜、胞内免疫荧光标记和流式细胞仪分别检测分析IFN-γ在CD8+Tim3+,CD4+Tim3+T细胞和CD8+Tim3-,CD4+Tim3-T细胞的表达水平,从而探讨Tim3对MM患者T细胞功能影响。结果:1.34例MM患者中男性17例,女性17例,其中ISS分期I期10例,II期9例,III期13例,2例未能行ISS分期;20/34例患者经PAD、PDD或PTD方案诱导化疗两疗程,14/20例PR,6/20例MR。2.1(1)初诊MM患者外周血CD4+T细胞上Tim3的表达水平(2.28±1.25)%较正常对照组(1.32±0.95)%显著上升(P=0.003),Pd-1的表达水平(16.64±5.92)%较正常对照组(12.13±5.13)%显著上升(P=0.0093);2.1(2)初诊MM患者骨髓CD4+T细胞上Tim3的表达水平(3.01±1.42)%较对照组(1.99±0.60)%显著上升(P=0.0127),Pd-1的表达水平(18.74±4.97)%较对照组(13.55±4.13)%显著上升(P=0.005);2.1(3)初诊MM患者中,骨髓CD4+T细胞上Tim3和Pd-1的表达水平均高于外周血CD4+T细胞上Tim3和Pd-1的表达水平,差异有统计学意义(P=0.0018,P=0.0003)。2.2(1)初诊MM患者外周血CD8+T细胞上Tim3的表达水平(7.38±3.32)%较正常对照组(2.87±1.56)%显著上升(P<0.0001),Pd-1的表达水平(20.52±7.56)%较正常对照组(12.44±4.35)%显著上升(P=0.0002);2.2(2)初诊MM患者骨髓CD8+T细胞上Tim3的表达水平(9.09±3.49)%较对照组(4.65±1.98)%显著上升(P=0.0001),Pd-1的表达水平(23.56±8.39)%较对照组(14.45±3.91)%显著上升(P=0.0002);2.2(3)初诊MM患者中,骨髓CD8+T细胞上Tim3和Pd-1的表达水平均高于外周血CD8+T细胞上Tim3和Pd-1的表达水平,差异有统计学意义(P=0.001,P=0.0004)。3.(1)经两疗程诱导化疗达PR的14例MM患者中,外周血CD8+T细胞上Tim3的表达水平为(3.79±2.06)%,显著低于其初诊时外周血CD8+T细胞上Tim3表达水平(6.73±2.96)%,差异存在统计学意义(P=0.0082);但其外周血CD8+T细胞上Pd-1表达水平在化疗前后未见明显差异;且其外周血CD4+T细胞上Tim3和Pd-1表达水平在化疗前后也未见明显差异。(2)经两疗程诱导化疗达PR的14例MM患者中,骨髓CD8+T细胞上Tim3的表达水平为(5.70±2.40)%,显著低于其初诊时骨髓CD8+T细胞上Tim3表达水平(9.19±3.46)%,差异存在统计学意义(P=0.0047);但其骨髓CD8+T细胞上Pd-1表达水平在化疗前后未见明显差异;且其骨髓CD4+T细胞上Tim3和Pd-1表达水平在化疗前后也未见明显差异。4.初诊MM患者中,骨髓CD8+T细胞上Tim3表达水平在13例ISS III期患者(9.95±3.47)%高于19例I-II期患者(7.33±2.24)%,差异有统计学意义(P=0.0279);但未发现其骨髓CD8+T细胞上Pd-1表达水平与ISS分期相关,也未发现其骨髓CD4+T细胞上Tim3及Pd-1表达水平与ISS分期相关。5.初诊MM患者中,骨髓Tim3+CD8+T细胞分泌IFN-γ水平为(2.46±0.74)%,较骨髓Tim3-CD8+T细胞分泌IFN-γ水平(5.35±2.59)%显著下降,差异有统计学意义(P=0.0007);其骨髓Tim3+CD4+T细胞分泌IFN-γ水平为(1.33±0.67)%,也较骨髓Tim3-CD4+T细胞分泌IFN-γ水平(3.95±2.38)%显著下降,差异有统计学意义(P=0.0003)。结论:1.初诊MM患者CD4+和CD8+T细胞上Tim3及Pd-1的表达水平均明显高于正常人,且在骨髓微环境中尤甚。2.经PAD、PDD或PTD方案诱导化疗两疗程达PR的MM患者外周血及骨髓CD8+T细胞上Tim3的表达水平明显低于初诊MM患者。3.初诊时,ISS III期MM患者的骨髓CD8+T细胞上Tim3表达水平高于I-II期MM患者。4.在初诊MM患者的骨髓CD4+和CD8+T细胞中,Tim3+的T细胞群体分泌IFN-γ水平显著低于Tim3-的T细胞群体。这提示Tim3和Pd-1不仅参与了MM的发生及发展,且Tim3表达水平与MM的治疗反应及预后相关;并证明了Tim3介导的T细胞功能抑制是骨髓瘤免疫逃逸机制之一。后续进一步研究可望为完善MM的发生发展机制及临床治疗提供新的策略和技术。