餐厨垃圾乙醇发酵残液是餐厨垃圾经乙醇发酵后,脱除油脂并蒸馏提取乙醇后残留的废弃物,其中含有大量的蛋白质,如果直接排放,易污染环境。如果将残液中的蛋白质转化成氨基酸肥料,既能解决污染,又能产生经济效益。因此,本研究构建了能分泌表达外源蛋白酶的重组产朊假丝酵母,利用重组蛋白酶水解发酵残液,并研究了不同蛋白酶之间的最佳协同作用效果,为今后的工业应用提供借鉴。比较毕赤酵母、酿酒酵母和产朊假丝酵母在低pH、高蛋白酶浓度环境下的生长状况后,选择情况最好的产朊假丝酵母作为外源蛋白酶表达宿主。将多个不同来源的蛋白酶基因整合到产朊假丝酵母中,比较重组蛋白酶活性后,选择酶活性最高的羧肽酶pepF、内切蛋白酶pepA和氨肽酶YPDF基因,优化启动子后,转入产朊假丝酵母,分别构建了能分泌表达三种蛋白酶的重组产朊假丝酵母。重组YPDF、pepF和pepA粗酶液酶活性分别为8.48U/mL、12.58 U/mL和17.14 U/mL;它们的最适pH在3-4之间,能适应酸性环境。将三个蛋白酶基因在产朊假丝酵母中进行共表达,得到的重组菌粗酶液酶活性为14.84 U/mL。以残液为底物研究三种重组酶的最佳协同配比发现,内切蛋白酶pepA和羧肽酶pepF的组合P₂A₁₁的水解效率最高,60 h时的氨基酸产量为23.85 mg/ml,蛋白水解率达为51.2%,相当于使用0.2 g/g商业化蛋白酶时的71.6%。