论文部分内容阅读
背景和目的EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)编码小RNA(EBV-encoded small RNAs,EBERs,包括EBER1和EBER2)是所有EBV潜伏类型中表达最为丰富的RNA,其致癌作用已在淋巴和上皮性肿瘤中得到证实。我们以往对山东地区EBV相关肿瘤和健康人群中EBERs基因多态性的研究中发现了新的EBERs变异型(EB-8m和EB-10m),该变异型虽然不是主要亚型但在NPC中的检出率高于EBV相关胃癌和健康人群。本研究旨在了解我国NPC高发区广东地区NPC和健康人群中EBERs基因变异特征,并与山东地区实验数据和已发表EBV基因组序列毒株中的EBERs序列进行比较,探讨EBERs基因变异与NPC的相关性,为最终明确EBV基因多态性与EBV相关肿瘤的关系提供实验依据。方法收集NPC高发区广东地区NPC组织标本和健康人群咽漱液(Throat washing,TW)标本,提取DNA,采用PCR和DNA测序检测EBERs基因序列,同时对山东地区新增EBV阳性NPC和健康人群标本进行EBERs基因序列检测,应用Lasergene软件对EBERs序列进行对比分析,应用MEGA软件绘制系统进化树,根据特征性突变对基因变异进行分类。在GenBank中剪切159个EBV基因组中EBERs基因序列,应用上述软件进行对比分析。比较NPC和健康人群之间以及不同地区之间EBERs基因变异型的分布情况,对标本及EBV毒株中EBV BamHI F片段多态性(F/f分型)与EBERs基因变异进行连锁分析。结果(1)根据系统进化树及特征性突变,EBERs基因可分为4种变异型:EB-6m、EB-8m、EB-10m和B95-8,其中EB-6m和EB-8m是主要变异型,广东地区健康人群以及山东地区NPC和健康人群中均以EB-6m为主,而广东地区NPC以EB-8m为主。广东地区NPC中EB-8m的检出率(82.0%,41/50)高于山东地区(33.7%,32/95),差异有显著性(χ2=30.590,P<0.0001),广东地区健康人群中EB-8m的检出率(32.74%,24/74)亦高于山东地区(1.1%,1/92),差异有显著性(χ2=31.501,P<0.0001)。两个地区NPC中的EB-8m检出率均高于健康人群,差异有显著性(广东:χ2=29.395,P<0.0001);山东:χ2=34.173,P<0.0001)。(2)159株EBV毒株的EBERs基因分为3种变异型:EB-6m、EB-8m和B95-8。EB-8m仅在中国南方EBV毒株中常见,在NPC毒株中的检出率高达86.5%(32/37);在中国北方、欧洲、美洲和澳大利亚毒株中,EB-6m为主要变异型;在非洲,B95-8和EB-6m为主要型别。B95-8型在非洲的检出率最高,其次为欧洲、美洲和澳大利亚,亚洲最低。(3)f型EBV仅在在广东地区NPC和来自中国南方NPC的EBV毒株有较高的检出率,分别是70.9%(39/55)和56.8%(21/37),f/EB-8m连锁基因型在广东地区NPC中的比率(64.0%,32/50)高于健康人群(21.0%,13/62),差异有显著性(χ~2=21.325,P<0.0001)。F型和f型EBV毒株中EBERs变异型的分布不同(P<0.0001),f型EBV主要对应EB-8m变异型,而F型主要对应EB-6m变异型。中国南方NPC中EB-8m的检出率高于f型,差异有显著性(χ2=13.136,P=0.0003,OR=10,95%CI:2.878-34.735)。结论(1)不同地域人群EBERs基因变异存在一定差异,EB-6m是各地域最常见的变异型,EB-8m变异型仅在中国南方NPC中流行,可能与NPC尤其是高发区NPC发生相关。(2)EB-8m与f型EBV存在关联性,作为高发区NPC中EBV基因变异的特异标志,EB-8m可能比f型更具有代表性。