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许多病毒感染可以引起宿主ATM/ATR依赖的DNA损伤应答,而不同原因导致的DNA损伤应答途径的激活均可引起宿主细胞的NKG2D配体的上调控。NKG2D配体是自然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)的激活性受体。NK细胞是一类独立的淋巴细胞群,其在早期免疫监视中发挥着重要的作用,是机体抵抗肿瘤和病毒感染的第一道防线。另外,NK细胞不表达特异性抗原识别受体,识别靶细胞无MHC的限制性,可以在无预先致敏的情况下杀伤肿瘤细胞和被感染的细胞。目前研究发现一些病毒通过抑制宿主细胞NKG2D配体的表达来抑制宿主的先天免疫。而另一方面NKG2D配体的持续激活,也可以导致宿主细胞被NK细胞识别,继而导致细胞损伤。本研究主要通过免疫印迹、流式细胞术及双荧光报告系统检测了乙肝病毒(hepatitis Bvirus,HBV)、丙肝病毒(hepatitis C virus,HCV)感染细胞后,DNA损伤应答途径的激活以及宿主细胞表面NKG2D配体的蛋白水平的变化,并且研究了NKG2D配体表达水平变化的机制。本实验室前期研究发现HBV感染能引起ATR依赖的DNA损伤应答途径,且用抑制ATR激酶的药物咖啡因处理HBV感染的细胞,可以抑制DNA损伤应答的激活,并且可以抑制病毒的复制。本研究发现HBV感染肝细胞系HL-7702后,细胞的NKG2D配体MICA的蛋白水平上调,加入咖啡因后可以抑制MICA的表达。通过双荧光报告系统检测发现,HBV感染在转录水平上调控MICA的表达,促使宿主细胞表面MICA水平上调。另外,本研究探讨了HCV感染是否能诱导宿主的DNA损伤应答。通过免疫印迹实验,我们发现ATR激酶的底物Chk1,ATM激酶的底物Chk2和H2AX磷酸化水平增强,以及ATM、ATR共同的底物p21表达水平增加。免疫共聚焦结果显示在细胞质与细胞核中Chk1-p和Chk2-p表达增多并形成的点状聚集。说明HCV感染激活了宿主的ATM/ATR途径。但是意外的是HCV感染细胞后其表面的NKG2D配体MICA的表达下调,而ULBP2无明显变化。据报道,NS3/4A蛋白酶在HCV引起的免疫抑制中起重要作用,因此我们检测了NS3/4A基因对NKG2D配体的影响,研究发现NS3/4A可以抑制MICA的表达,并且这种抑制作用也是发生在转录水平上的。综上所述,我们证明了HBV通过DNA损伤引起的ATR依赖的DNA损伤应答上调控NKG2D配体MICA的表达,这可能是HBV感染引起肝细胞损伤的原因。另外研究发现HCV通过其蛋白酶NS3/4A下调了NKG2D配体MICA的表达,而这可能是HCV逃逸NK细胞杀伤的原因之一。我们的研究结果对研究HBV和HCV感染的免疫机制有一定的理论意义。